沉默蛋白磷酸酶1H對(duì)人胰腺癌BxPC-3細(xì)胞株腫瘤惡性表型的影響.pdf

1、目的：探討沉默蛋白磷酸酶1H(Protein phosphatase1H，PPM1H)對(duì)人胰腺癌BxPC-3細(xì)胞株EMT以及增殖、凋亡的影響。
　　方法：應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白質(zhì)印跡法（Western Blot）檢測(cè)不同胰腺癌細(xì)胞株中PPM1H的表達(dá)差異；分別以TGF-β110 ng/ml和BMP2200ng/ml處理人胰腺癌 BxPC-3細(xì)胞株后，應(yīng)用 qRT-PCR和蛋白質(zhì)印跡法(Western Blo

2、t)檢測(cè)PPM1H及EMT相關(guān)分子(E-cadherin、vimentin等)的表達(dá)；采用RNA干擾(RNA interference，RNAi)技術(shù)，沉默PPM1H基因的表達(dá)，應(yīng)用qRT-PCR和蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)檢測(cè) PPM1H及 EMT相關(guān)分子(E-cadherin、vimentin等)的表達(dá)；利用Transwell侵襲遷移實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究其對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響；分別采用CCK-8(cell count

3、ing kit-8)法以及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PPM1H基因沉默后對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株BxPC-3增殖及凋亡的影響。
　　結(jié)果：qRT-PCR和蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)分別從m-RNA及蛋白水平證實(shí)了PPM1H在不同人胰腺癌細(xì)胞株(BxPC-3、PANC-1、MIA-PACA2、SW1990、PANC-03.27等)中表達(dá)均比正常人胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞(HPDE6-C7)中低；分別以10 ng/ml TGF-β1和200ng/m

4、l BMP2處理人胰腺癌BxPC-3細(xì)胞株后，均成功誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生EMT，發(fā)現(xiàn)PPM1H表達(dá)明顯下調(diào)；RNA干擾技術(shù)沉默PPM1H基因后，qRT-PCR和蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)均顯示E-cadherin表達(dá)明顯降低，vimentin表達(dá)明顯增加，說明沉默PPM1H基因可以誘導(dǎo)人胰腺癌BxPC-3發(fā)生EMT；Transwell侵襲遷移實(shí)驗(yàn)顯示，沉默PPM1H基因后可促進(jìn)BxPC-3細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力；細(xì)胞增殖和凋亡實(shí)驗(yàn)顯示