沉默蛋白磷酸酶1H對人胰腺癌BxPC-3細胞株腫瘤惡性表型的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：探討沉默蛋白磷酸酶1H(Protein phosphatase1H，PPM1H)對人胰腺癌BxPC-3細胞株EMT以及增殖、凋亡的影響。
　　方法：應用實時熒光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白質印跡法（Western Blot）檢測不同胰腺癌細胞株中PPM1H的表達差異；分別以TGF-β110 ng/ml和BMP2200ng/ml處理人胰腺癌 BxPC-3細胞株后，應用 qRT-PCR和蛋白質印跡法(Western Blo

2、t)檢測PPM1H及EMT相關分子(E-cadherin、vimentin等)的表達；采用RNA干擾(RNA interference，RNAi)技術，沉默PPM1H基因的表達，應用qRT-PCR和蛋白質印跡法(Western Blot)檢測 PPM1H及 EMT相關分子(E-cadherin、vimentin等)的表達；利用Transwell侵襲遷移實驗進一步研究其對腫瘤細胞侵襲轉移能力的影響；分別采用CCK-8(cell count

3、ing kit-8)法以及流式細胞術檢測PPM1H基因沉默后對人胰腺癌細胞株BxPC-3增殖及凋亡的影響。
　　結果：qRT-PCR和蛋白質印跡法(Western Blot)分別從m-RNA及蛋白水平證實了PPM1H在不同人胰腺癌細胞株(BxPC-3、PANC-1、MIA-PACA2、SW1990、PANC-03.27等)中表達均比正常人胰腺導管上皮細胞(HPDE6-C7)中低；分別以10 ng/ml TGF-β1和200ng/m

4、l BMP2處理人胰腺癌BxPC-3細胞株后，均成功誘導細胞發(fā)生EMT，發(fā)現PPM1H表達明顯下調；RNA干擾技術沉默PPM1H基因后，qRT-PCR和蛋白質印跡法(Western Blot)均顯示E-cadherin表達明顯降低，vimentin表達明顯增加，說明沉默PPM1H基因可以誘導人胰腺癌BxPC-3發(fā)生EMT；Transwell侵襲遷移實驗顯示，沉默PPM1H基因后可促進BxPC-3細胞的侵襲轉移能力；細胞增殖和凋亡實驗顯示

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