Dp71在胃癌中的表達及其生物學意義研究.pdf

1、肌營養(yǎng)不良蛋白Dystrophin是導致杜氏肌營養(yǎng)不良癥(Duchenne muscular dystrophy，DMD)的致病基因，該基因在不同的組織中和不同的組織特異性啟動子結合，可以產(chǎn)生不同的剪切本。Dystrophin Dp71是其表達最廣泛的一個剪切本。通過和其他一些蛋白形成蛋白復合物，Dp71在各個不同的組織起著支撐和信號傳遞的作用。相關文獻報道Dp71介導的細胞的分化、增殖、黏附。改變Dp71的表達可以引起PC12細胞的細

2、胞周期發(fā)生改變。作為一種可以參與細胞分裂周期的蛋白，本課題檢測Dp71 mRNA和蛋白在胃癌組織和癌旁組織，正常人胃上皮細胞(GES-1)和胃癌細胞系(AGS，SGC-7901和BGC-823)中的表達，分析其表達差異是否具有統(tǒng)計學意義;消減Dp71蛋白在正常胃粘膜細胞GES-1中的表達，提高Dp71在胃癌細胞系SGC-7901中的表達，并檢測細胞的活力與增殖能力，初步探討Dp71在胃癌中表達改變的生物學意義。
　　實驗方法:(1

3、)采用實時熒光定量PCR，western blotting、免疫組織化學技術檢測Dp71在胃癌組織及癌旁組織，人胃粘膜上皮細胞及三種胃癌細胞系中的表達水平。
　　(2) PCR、酶切及連接反應構建Dp71的RNA干擾質(zhì)粒，酶切、測序驗證質(zhì)粒構建是否成功，western blotting檢測構建的RNA干擾質(zhì)粒對于人胃粘膜上皮細胞Dp71蛋白的消減效率。
　　(3)采用cck8法檢測轉(zhuǎn)染了Dp71的RNA干擾質(zhì)粒人胃粘膜上皮細

4、胞，轉(zhuǎn)染了Dp71真核表達質(zhì)粒的SGC-7901細胞的活力與增殖能力。探討Dp71的可能抑癌機制。
　　實驗結果:(1) Real-time PCR，western blot和免疫組織化學和結果顯示:Dp71在胃癌組織的表達明顯低于癌旁組織。免疫組化結果表明:Dp71蛋白表達改變與胃癌的分化程度和淋巴結轉(zhuǎn)移相關(P＜0.05)，而與性別，年齡，浸潤深度，TNM分期，遠處轉(zhuǎn)移及腫瘤大小無關。
　　(2)和人胃粘膜上皮細胞GES

5、-1相比，胃癌細胞株AGS，SGC-7901，BGC-823的Dp71的mRNA和蛋白表達降低。
　　(3)成功構建Dp71的RNA干擾質(zhì)粒，于人胃粘膜上皮細胞(GES-1)中轉(zhuǎn)染Dp71干擾質(zhì)粒，檢測細胞增殖能力改變，發(fā)現(xiàn)干擾Dp71后，細胞增殖活力沒有改變。
　　(4)胃癌細胞SGC-7901轉(zhuǎn)染Dp71真核表達質(zhì)粒Dp71f，Dp71d，和轉(zhuǎn)染空白質(zhì)粒和空白SGC-7901細胞株相比，在48小時，72小時呈現(xiàn)出增殖能力