HSF1對Dp71表達的調控研究.pdf

1、Dp71是抗肌萎縮蛋白(dystrophin)基因家族在諸多組織均有表達的一個具有多種功能的同源異構體蛋白。近年來的一系列研究表明:該蛋白在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育，神經(jīng)系統(tǒng)功能的維護以及神經(jīng)細胞的黏附和增殖過程起著重要的作用。作為介導應激反應中熱休克蛋白(heat shock proteins，HSPs)產生的重要轉錄因子，熱休克因子1(heatshock factor1，HSF1)還能通過結合其他基因（如iNOS、Fas）啟動子區(qū)的HSE影響

2、其mRNA和蛋白水平表達來發(fā)揮其他生物學功能。生物信息學軟件分析發(fā)現(xiàn)小鼠和人的Dp71啟動子區(qū)含有一個熱休克元件(HSE)，表明Dp71的表達可能受到HSF1的調控。本課題主要是研究HSF1對Dp71基因的表達的影響，從而探討Dp71作為HSF1可能的下游調節(jié)產物，最終導致HSF1基因敲除小鼠產生一系列神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。
　　本課題主要采取以下方法:1、取野生型小鼠和HSF1敲除小鼠的大腦、肺、肝臟、腎臟、脾臟等組織，提取蛋白和mRN

3、A做Western-blot和Real time RT-PCR，在整體動物上檢測HSF1敲除對DP71在非肌肉組織中表達水平的影響;2、人肺癌A549細胞轉染HSF1真核表達質粒和干擾質粒，Western-blot和Real time RT-PCR檢測細胞中HSF1表達的上調或下調對DP71的mRNA和蛋白表達水平的影響;3、EMSA和雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)從分子水平驗證HSF1與Dp71基因啟動子區(qū)HSE的結合。
　　結果顯示:

4、(1)和野生型小鼠相比，HSF1敲除小鼠非肌肉組織中Dp71的mRNA和蛋白表達水平下降，其中腦組織和肺組織中表達有差異，其差值具有統(tǒng)計學意義;(2) A549細胞中轉染HSF1真核表達質粒和干擾質粒明顯升高和降低A549細胞Dp71的mRNA和蛋白表達水平(3) EMSA和熒光素酶報告基因證實HSF1能與Dp71基因啟動子區(qū)的HSE直接結合。以上結果表明:整體動物中HSF1缺失可使Dp71在非肌肉組織中表達降低;HSF1過表達和表達抑