LY294002提高與HS-5細(xì)胞共培養(yǎng)后的急性髓系白血病細(xì)胞對(duì)As2O3的敏感性.pdf

1、目的：探討LY294002對(duì)與骨髓基質(zhì)HS-5細(xì)胞共培養(yǎng)后的人急性髓系白血?。ˋML）細(xì)胞對(duì)As2O3敏感性的增強(qiáng)作用。
　　方法：1.建立人AML細(xì)胞株（NB4細(xì)胞、HL60細(xì)胞與U937細(xì)胞）與骨髓基質(zhì)HS-5細(xì)胞共培養(yǎng)體系以模擬體內(nèi)造血微環(huán)境中的AML細(xì)胞，采用CD45+免疫磁珠分選粘附于HS-5細(xì)胞表面生長(zhǎng)的AML細(xì)胞；2.采用MTT法及臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測(cè)AML細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性；3.Annexin-V-FITC/PI雙染流

2、式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)AML細(xì)胞的凋亡率；4.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)AML細(xì)胞的周期時(shí)相分布；5.Western blot方法檢測(cè)AML細(xì)胞內(nèi)蛋白p-AktSer473、p-AktThr308、p-PDK1與p-PTEN表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　As2O3可明顯抑制單獨(dú)懸浮培養(yǎng)的AML細(xì)胞的生長(zhǎng)。隨著劑量的增大和作用時(shí)間的延長(zhǎng)，As2O3對(duì)AML細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用越趨明顯。3株AML細(xì)胞中NB4細(xì)胞對(duì)As2O3的敏感性最高。與HS-5細(xì)胞共

3、培養(yǎng)后，NB4細(xì)胞、HL60細(xì)胞與U937細(xì)胞對(duì)As2O3的敏感性明顯減低，增殖抑制率分別為（15.86±3.01）％VS（62.92±2.74）%、（14.96±1.40）%VS（48.54±4.54）%、（19.19±2.39）%VS（52.53±2.99）%。與As2O3單獨(dú)作用相比，經(jīng)LY294002與As2O3聯(lián)合處理后，與HS-5細(xì)胞共培養(yǎng)后的NB4細(xì)胞、HL60細(xì)胞與U937細(xì)胞的增殖抑制率明顯提高，分別為（33.95±4

4、.35）%VS（15.86±3.01）%、（34.77±2.07）%VS（14.96±1.40）%、（38.09±2.24）%VS（19.19±2.39）%。
　　與單獨(dú)懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞相比，與HS-5細(xì)胞共培養(yǎng)后的NB4細(xì)胞、HL60細(xì)胞與U937細(xì)胞對(duì)As2O3所誘導(dǎo)的凋亡強(qiáng)度均明顯減弱，共培養(yǎng)后的凋亡率分別為（13.60±0.85）%VS（23.44±2.37）%、（9.84±1.99）%VS（17.97±1.58）%、（7.

5、28±1.78）% VS（17.76±2.13）%。與單獨(dú)懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞相比，與HS-5細(xì)胞共培養(yǎng)1d后，NB4細(xì)胞、HL60細(xì)胞與U937細(xì)胞中G0/G1期的細(xì)胞比例明顯增加，分別為（52.53±2.39）%VS（32.47±2.8）%、（47.02±3.42）%VS（30.31±2.07）%、（63.02±2.46）%VS（41.46±2.58）%；S期細(xì)胞比例明顯減少，分別為（36.87±3.28）%VS（60.35±4.88）%

6、、（45.45±4.33）%VS（62.33±2.27）%、（28.53±2.44）%VS（51.56±3.69）%。
　　LY294002單獨(dú)作用2-12h，可明顯抑制AM L細(xì)胞內(nèi)PI3K/Ak t信號(hào)通路：正調(diào)控蛋白p-AktSer473、p-AktThr308與p-PDK1明顯下調(diào)，負(fù)調(diào)控蛋白p-PTEN上調(diào)；且隨著LY294002作用時(shí)間的延長(zhǎng)，對(duì)信號(hào)通路的抑制越明顯。與 HS-5細(xì)胞共培養(yǎng)后，AML細(xì)胞內(nèi)PI3K/Ak

7、t信號(hào)通路被激活：蛋白p-AktSer473、p-AktThr308與p-PDK1明顯上調(diào)，蛋白p-PTEN明顯下調(diào)；而經(jīng)LY294002處理后，可明顯抑制已被激活的PI3K/Akt通路。與LY294002單獨(dú)作用相比，LY294002聯(lián)合As2O3處理后，共培養(yǎng)后的AML細(xì)胞內(nèi)蛋白p-AktSer473進(jìn)一步下調(diào)。
　　結(jié)論：聯(lián)合PI3K/Akt信號(hào)通路特異性阻斷劑LY294002可明顯提高與HS-5細(xì)胞共培養(yǎng)后的AML細(xì)胞對(duì)A