蛋白激酶C抑制劑增強(qiáng)慢性髓系白血病細(xì)胞對三氧化二砷化療敏感性的研究.pdf

1、第一部分:目的:研究三氧化二砷(As<,2>O<,3>)對慢性髓系白血病細(xì)胞(K562)的作用特點及其機(jī)制,為擴(kuò)大As<,2>O<,3>的臨床應(yīng)用提供指導(dǎo).方法:以不同濃度As<,2>O<,3>作用于K562細(xì)胞后,四唑鹽(MTT)比色試驗分析細(xì)胞的生長增殖;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期分布、細(xì)胞凋亡;流式細(xì)胞術(shù)和Western-Blot檢測細(xì)胞Survivin抗原表達(dá);RT-PCR檢測細(xì)胞Survivin mRNA的表達(dá).結(jié)果:2~10μm

2、ol/L的As<,2>O<,3>能有效抑制K562細(xì)胞增殖,但未能誘導(dǎo)明顯的細(xì)胞凋亡.周期分析顯示,As<,2>O<,3>作用后G<,2>/M周期細(xì)胞比例顯著增多;同時G<,2>/M細(xì)胞周期依賴性表達(dá)的凋亡抑制蛋白Survivin mRNA和蛋白表達(dá)水平增加.結(jié)論:As<,2>O<,3>明顯抑制K562細(xì)胞的生長,其機(jī)制主要是誘導(dǎo)G<,2>/M期細(xì)胞周期停滯,可能是K562細(xì)胞對As<,2>O<,3>誘導(dǎo)凋亡抵抗的機(jī)制之一;同時Surv

3、ivin表達(dá)上調(diào)進(jìn)一步抑制了K562細(xì)胞對As<,2>O<,3>誘導(dǎo)凋亡的敏感性.第二部分:目的:研究G?976是否能去除As<,2>O<,3>誘導(dǎo)的G<,2>/M期細(xì)胞周期阻滯,增強(qiáng)慢性髓系白血病(CML)細(xì)胞(K562)對As<,2>O<,3>誘導(dǎo)凋亡的敏感性.方法:K562細(xì)胞經(jīng)不同濃度G?976和As<,2>O<,3>(5μmol/L)作用后,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期變化,臺盼藍(lán)排斥試驗檢測細(xì)胞活力,四唑鹽(MTT)比色試驗分析細(xì)

4、胞的生長增殖.結(jié)果:細(xì)胞周期檢測發(fā)現(xiàn),K562細(xì)胞經(jīng)As<,2>O<,3>作用24h和48h后,G<,2>/M期細(xì)胞比例分別為(38.02±7.70)％和(32.58±7.43)％,未出現(xiàn)明顯凋亡;50nmol/L G?976與As<,2>O<,3>聯(lián)合作用后,G<,2>/M期細(xì)胞分別減少至(23.24±2.93)％和(16.18±1.60)％,凋亡細(xì)胞分別增加至(11.82±2.31)％和(27.80±22.89)％;且其變化呈G?9