NogoA疫苗聯(lián)合嗅鞘細(xì)胞移植治療急性脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：脊髓損傷是常見疾患，造成許多病人肢體功能的障礙。嗅鞘細(xì)胞(OEG)兼有雪旺氏細(xì)胞與星形肢質(zhì)細(xì)胞的雙重功能特點(diǎn)，它能伴從周圍神經(jīng)(PNS)進(jìn)入中樞神經(jīng)(CNS)而不同于雪旺氏細(xì)胞僅局限于PNS中，克服雪旺氏細(xì)胞與成纖維細(xì)胞在脊髓移植中功能的不足；嗅鞘細(xì)胞尚可分泌多種神經(jīng)生長因子等促進(jìn)損傷脊髓軸突的再生，由于損傷部位眾多抑制因子的分泌，實(shí)驗(yàn)中在損傷稍遠(yuǎn)處觀察到再生軸突的數(shù)量仍較少。NogoA是主要的軸突再生抑制因子，針對(duì)其的抗體IN-

2、1可以封閉其抑制作用，而促進(jìn)軸突的再生。由于外源性抗體存在半衰期短的問題。本研究的目的是以NogoA主要功能區(qū)段Nogo66的13肽為抗原，制備疫苗，免疫大鼠，刺激產(chǎn)生抗NogoA-13肽抗體，在拮抗抑制因素的同時(shí)植入OEG細(xì)胞，以增加其促進(jìn)因素，觀察比較聯(lián)合NogoA疫苗和OEG移植對(duì)脊髓損傷大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)及神經(jīng)再生的作用，進(jìn)一步探討脊髓損傷后促進(jìn)神經(jīng)再生所需的最佳微環(huán)境。 方法：使用人工合成的NogoA主要功能區(qū)段Nogo

3、66的13肽，結(jié)合的大分子蛋白鑰孔帽貝血藍(lán)蛋白(KLH)，增強(qiáng)其免疫源性。給予純化后預(yù)先給大鼠進(jìn)行腹腔免疫，在脊髓損傷前刺激出自身抗NogoA的抗體，并檢測抗體的滴度和與抗原抗體反應(yīng)的結(jié)合能力，檢測疫苗的安全性即大鼠實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎(EAE)的發(fā)生率。脊髓損傷的同時(shí)植入OEG細(xì)胞，連續(xù)觀察12周時(shí)間，與單純疫苗、單純OEG治療組及單純損傷的大鼠進(jìn)行行為學(xué)及組織學(xué)比較。 結(jié)果：ELISA檢測到免疫大鼠血清中存在抗NogoA

4、的抗體，免疫大鼠未發(fā)現(xiàn)有EAE的表現(xiàn)；NogoA疫苗聯(lián)合OEG移植組大鼠BBB評(píng)分優(yōu)于其他三組，生物素葡聚糖胺(BDA)神經(jīng)示蹤和抗神經(jīng)絲蛋白(NF)染色損傷區(qū)頭尾側(cè)神經(jīng)纖維計(jì)數(shù)多于其他三組。 結(jié)論：Nogo66-13肽與KLH偶聯(lián)后形成NogoA多肽疫苗可刺激出自身抗體，能夠產(chǎn)生抗原抗體反應(yīng)，免疫大鼠未見EAE的出現(xiàn)，并具有一定的安全性，NogoA疫苗聯(lián)合OEG比單純使用疫苗和OEG移植更能促進(jìn)急性脊髓挫傷神經(jīng)纖維再生和功能恢