重組幽門螺桿菌過氧化氫酶對實驗性結腸炎大鼠腸黏膜的保護作用.pdf

1、背景與研究目的作者所在既往研究中克隆了制備了重組幽門螺桿菌過氧化氫酶(recombinant helicobacter pylori catalase,rHpCAT),活性遠較常用的牛肝過氧化氫酶為高.該研究探討了該酶對實驗性大鼠腸炎的治療作用與分子機制.內容包括: 1.rHpCAT對實驗性結腸炎大鼠腸粘膜損害的保護作用;2.rHpCAT對腸粘膜細胞凋亡的影響;3.rHpCAT對腸粘膜細胞COX-2表達和核轉錄因子NF-κB激活的影響.

2、方法1.用三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulfonic acid ,TNBS)制備SD大鼠實驗性腸炎模型.隨機分成5個組:正常對照組:飼以常規(guī)鼠糧,不作任何處理;模型組:用TNBS誘導制作成腸炎模型后,不作其他干預;5-氨基水揚酸(5-Aminosalicvlic acid,5-ASA)治療組:大鼠制模后,用5-ASA灌腸干預;rHpCAT治療組:大鼠制模后,用rHpCAT灌腸干預;rHpCAT預防組:在大鼠制模前,先

3、用rHpCAT灌腸干預一周,大鼠TNBS誘導制模后,處理方法同rHpCAT處理組.在適當?shù)臅r間點,用光學顯微鏡、電子顯微鏡等觀察各組大鼠結腸粘膜的形態(tài)學變化.2.用TdT介導的dUTP缺口末端標記法(TUNEL)和Hoechst 33258熒光染色標記法檢測各實驗組大鼠結腸粘膜細胞的凋亡指數(shù).3.用免疫組化、逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)和免疫印跡法(western blotting)檢測環(huán)氧化酶2(COX-2)在各實驗組大鼠結腸

4、粘膜的表達情況.4.用電泳遷移率(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)檢測環(huán)氧合酶2基因源核轉錄因子κB(nuclear factore κB,NF-κB)在各實驗組大鼠結腸粘膜上皮的激活情況.5.用腸粘膜細胞LOVO細胞和SW480細胞體外制作氧化應激模型,用HpCAT干預,用2 ′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate(DCF-DA)標記各處理

5、組的細胞,在流式細胞儀上檢測各實驗組腸粘膜細胞活性氧產生情況.結論1.rHpCAT能有效改善實驗性腸炎大鼠的腸粘膜炎性損害,對腸粘膜具有保護作用,其效果與傳統(tǒng)藥物5-ASA相近或更好.2.rHpCAT能夠抑制實驗性腸炎大鼠腸粘膜細胞的凋亡,其中預處理組效果最佳,這可能是rHpCAT保護腸粘膜與抗炎的主要原因.3.rHpCAT能明顯抑制腸粘膜細胞產生內源性ROS,下調腸粘膜上皮的COX-2表達,抑制NF-κB激活,這可能是rHpCAT抗炎