妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥胎兒心肌細(xì)胞損傷機(jī)制研究.pdf

1、妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥（ICP，intrahepatic cholestasis of pregnancy)，是妊娠中晚期特有的并發(fā)癥，臨床上以孕婦發(fā)生皮膚瘙癢、黃疸異常為特征。大多伴有肝功能生化指標(biāo)的異常。ICP孕婦預(yù)后良好，產(chǎn)后瘙癢和黃疸迅速消退。主要危害胎兒，致早產(chǎn)、胎兒宮內(nèi)窘迫、神經(jīng)系統(tǒng)損傷及死胎等，使圍產(chǎn)兒發(fā)病率及死亡率升高。特別是妊娠晚期突然出現(xiàn)的胎死宮內(nèi)（猝死），難以預(yù)料，臨床上也缺乏有效的檢測(cè)手段。研究表明，約50％以上的

2、胎兒猝死與此有關(guān)。因此很有必要探討妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥胎兒猝死的機(jī)制及影響因素，并提出相應(yīng)的治療方案。
　　本研究通過(guò)檢測(cè)ICP新生兒總膽汁酸、甘膽酸、心肌酶CK、LDH、肌鈣蛋白及心電圖，進(jìn)行臨床分析，并構(gòu)建ICP孕鼠模型，研究ICP患者血清中高濃度膽汁酸與胎兒進(jìn)行性加重的心律失常和突發(fā)性胎兒死亡的關(guān)系，從而進(jìn)一步探討ICP胎兒心肌損傷機(jī)制。
　　本實(shí)驗(yàn)分兩部分：
　　第一部分：ICP新生兒臍血總膽汁酸水平與心肌酶譜

3、，肌鈣蛋白，心電圖改變的關(guān)系。
　　選擇2009年1月至2011年1月于我院產(chǎn)前檢查并住院分娩確診為ICP（輕度、重度）孕婦及正常孕婦各50例，對(duì)其總膽汁酸、甘膽酸，AST、ALT、TBLL、DBLL、及其分娩新生兒的總膽汁酸、心肌酶譜中的肌酸激酶（CK）、乳酸脫氫酶（LDH）及肌鈣蛋白，心電圖進(jìn)行測(cè)定。
　　結(jié)果：
　　1.正常對(duì)照組孕婦血清CG含量為2.7±1.5mg/ml，重度ICP組血清CG含量為32.7±4.

4、4mg/ml，重度組CG值明顯高于正常妊娠組、輕度組數(shù)倍到數(shù)十倍（P<0.01）；重度組TBA、ALT均比對(duì)照組、輕度組有所升高（P<0.05），各為2～3倍或4～6倍；重度組TBIL、DBIL比正常對(duì)照組、輕度組輕度增高（P<0.05）。對(duì)照組與輕度ICP組無(wú)明顯差異。CG診斷ICP的較為敏感指標(biāo)之一。
　　2.ICP新生兒臍血TBA水平明顯高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3.ICP輕度組、重度組與對(duì)

5、照組新生兒LDH、CK、cTnI濃度比較。膽汁酸值越高，血清心肌酶活性也相應(yīng)升高。輕度ICP組新生兒與對(duì)照組CK、LDH、cTnI水平相比無(wú)顯著差異（P>0.05），ICP重度組新生兒CK、LDH、cTnI水平明顯高于對(duì)照組及輕度組，有顯著差異（P<0.05）。
　　4.ICP患兒TBA濃度與CK，cTnI、心電圖有相關(guān)性。ICP患兒各有不同的臨床表現(xiàn)，并伴有心肌酶譜各項(xiàng)指標(biāo)不同程度的增高及不同類型的心電圖改變；隨著膽汁酸值的升高

6、，血清心肌酶活性也有一定的升高，心電圖異常率也相應(yīng)增多，表明ICP患兒存在不同程度的心肌損傷。
　　結(jié)論：
　　高濃度膽汁酸對(duì)胎兒的心肌細(xì)胞有直接的毒性作用，是造成ICP胎兒猝死的原因之一。
　　第二部分：大鼠ICP模型的構(gòu)建及心肌細(xì)胞損傷機(jī)制探討。
　　實(shí)驗(yàn)選用清潔級(jí)SD雌性大鼠與雄性SD大鼠為模型，各選一對(duì)在一籠內(nèi)共同飼養(yǎng)，每天通過(guò)觀察是否有脫落的陰栓蠟塊來(lái)確定是否妊娠，自發(fā)現(xiàn)陰栓脫落日起，分籠飼養(yǎng)待用。取孕

7、14天，SD大鼠60只，隨機(jī)分為高、低雌激素組和對(duì)照組，每組20只先抽血做各項(xiàng)生化指標(biāo)的測(cè)定。隨后分別在其后肢內(nèi)側(cè)皮下注射苯甲酸雌二醇，劑量分別為5.0mg/（Kg.d）（高劑量），1.2mg/（Kg.d）（低劑量）和2ml/（Kg.d）的生理鹽水，1次/天，連續(xù)5天。孕20天，以氯安酮120g/kg麻醉孕鼠剖宮取胎，收集一窩胎鼠，并將胎鼠逐個(gè)稱重，、觀察胎鼠、計(jì)算死胎率。每組孕鼠于孕14天建模前及20天(120mg/Kg氯胺酮麻醉后)

8、剖宮產(chǎn)前從眶靜脈采取全血2ml室溫下靜置3分鐘，離心10分鐘后取血清1ml檢測(cè)各項(xiàng)生化指標(biāo)。同時(shí)剖開子宮，收集一窩胎鼠，并逐個(gè)稱重。胎鼠斷頭取血，一窩胎鼠的胎血集合在一起。同時(shí)取固定于10％甲醛的心肌組織，梯度乙醇脫水、浸蠟（8h），石蠟包埋，連續(xù)切片（片厚5m），每間隔5張取1張切片，蘇木精和伊紅（Hematoxylin-Eosin Stain，HE）染色，觀測(cè)胎鼠心肌組織切片及顯微鏡下病理結(jié)構(gòu)改變，取胎鼠心肌組織進(jìn)行HE染色觀察病理

9、結(jié)構(gòu)改變及提取線粒體測(cè)定ROS及膜電勢(shì)水平。
　　結(jié)果：
　　1.動(dòng)物模型制備結(jié)果，用藥都達(dá)到ICP的診斷標(biāo)準(zhǔn)，模型制備成功。
　　2.高激素組晚期死亡胚明顯高于低激素組及對(duì)照組。
　　3.高激素組可引起孕鼠血清生化指標(biāo)和心肌酶譜高于對(duì)照組。
　　4.誘導(dǎo)ICP可以引起胎鼠膽酸升高、心肌酶譜變化，提示這可能是ICP導(dǎo)致突發(fā)不明原因死胎的原因之一。
　　5.高激素組胎鼠較低激素組及對(duì)照組胎鼠心肌細(xì)胞明顯