芍藥苷抑制HMGB1釋放對肝組織炎癥和纖維化的保護作用.pdf

1、研究背景：
　　 肝纖維化是肝損傷的一種修復反應也是一個可逆性的病理過程，而肝硬化是難以逆轉(zhuǎn)的病理改變。所以現(xiàn)在研究延緩肝纖維化的發(fā)生已成為一個熱點。通過動物實驗和我們先前的細胞實驗初步證明了芍藥苷(paeoniflorin Pae)通過抑制了包括HMGB1、TNF-α等在內(nèi)的炎癥介質(zhì)的釋放，對抗缺氧誘導的細胞損傷來發(fā)揮抗炎、保護臟器的作用。HMGB1作為一種有效的炎癥介質(zhì)，是肝纖維化發(fā)生發(fā)展的直接或間接的關鍵因素。在新近的一項

2、研究揭示了炎癥信號通路與肝纖維化通路有交叉對話(cross-talk)。肝臟的慢性炎癥是發(fā)生肝纖維化的主要原因之一。由此我們推測在CCL4誘導動物模型中，芍藥苷是通過抑制HMGB1釋放來發(fā)揮抗炎和抗纖維化的作用。
　　 目的：
　　 研究芍藥苷抑制HMGB1釋放對肝組織炎癥和纖維化的保護作用。
　　 方法：
　　 第一部分實驗：昆明雄性小鼠30只，采用CCL4灌胃法制備肝纖維化模型，隨機分為正常對照組（1

3、ul/g體重，生理鹽水/5d灌胃）、模型組（1ul/g體重，CCL4花生油溶液5d灌胃）、Pae組（造模同時，Pae100ng/g體重/5d灌胃），6周后小鼠纖維化模型建成。各組動物處理前12小時禁食．摘除眼球法取血，ELISA法檢測血清中TGF-p、TNF-α的含量；分別對肝組織病理切片做HE染色和天狼猩紅染色觀察肝組織病理改變和膠原纖維形成情況；半定量RT-PCR法檢測小鼠肝組織中TGF-β、TNF-α水平。
　　 第二部分

4、實驗：昆明雄性小鼠40只，采用CCL4灌胃法制備肝纖維化模型，隨機分為模型組（1ul/gCCL4油溶液/5d灌胃）、Pae組（造模同時，Pae100ng/g體重/5d灌胃）；Pae+HMGB1組（造模同時，Pae100ng/g體重/5d灌胃+HMGB110μg體重/5d/腹腔注射）、拮抗HMGBl組（造模同時，HMGB1Ab10μg/g體重/5d/腹腔注射）。各組動物處理前12小時禁食，摘除眼球法取血，ELISA法檢測血清中TGF-β、

5、TNF-α的含量；分別對肝組織病理切片做HE染色和天狼猩紅染色觀察肝組織病理改變和膠原纖維形成情況；半定量RT-PCR法檢測小鼠肝組織中TGF-β、TNF-α表達水平。
　　 結果：
　　 1.6周后1ml/kgCCL4誘導肝纖維化動物模型建立成功，病理組織學檢查發(fā)現(xiàn)，正常對照組小鼠肝組織的肝小葉結構清晰，肝細胞索由中央靜脈向四周排列整齊；模型組早期肝纖維化形成；Pae組可明顯減輕小鼠肝組織的病理損傷；為進一步研究抗纖維

6、化藥物的篩選和評價研究奠定基礎。
　　 2.Pae對CCL4誘導動物模型有抗炎和抗纖維化的作用。ELISA結果顯示Pae組與模型組相比，動物血清中TGF-β、TNF-的含量明顯減少(P＜0.05)。RT-PCR結果顯示Pae組TGF-β、TNF-β水平明顯減少(P＜0.05)。
　　 3.Pae+HMGB1組動物的肝組織纖維沉積量和血清中TGF-β、TNF-α的含量與模型組無顯著差異(P＞0.05)。
　　 4.

7、Pae組和拮抗HMGB1組的動物的肝組織纖維沉積量和血清中TGF-β、TNF-α的含量與模型組無顯著差異(P＞0.05)；但兩組均較模型組和Pae+HMGB1組明顯減少(P＜0.05)。
　　 結論：
　　 Pae能明顯減少CCL4肝纖維化動物模型相關炎癥因子和纖維化的表達水平；外源性注射HMGB1能抵消Pae的抗炎和抗纖維化作用，而且拮抗HMGB1同樣可以對模型鼠肝臟炎癥和纖維化起到保護作用；提示Pae是通過抑制HMG