化合物抑制體內外巨噬細胞活化釋放HMGB1及其機制研究.pdf

1、乙型肝炎病毒能引起人類乙型病毒性肝炎，采取早期干預措施減輕肝炎，對于降低“病死率”具有重要意義。巨噬細胞通過釋放促炎細胞因子在炎癥中起著重要作用。高遷移率族蛋白1(HMGB1)以主動方式從活化巨噬細胞釋放出去，是一個重要晚期致炎因子。
　　本課題旨在用LPS活化巨噬細胞體外模型篩選較優(yōu)抗炎化合物，進一步研究其抗炎作用是否與HMGB1有關并對其機制進行探析。
　　本論文分為以下四個部分:
　　第一部分較優(yōu)抗炎化合物的篩選

2、
　　目的：從40種化合物中體外篩選較優(yōu)抗炎化合物。
　　方法：RAW264.7細胞經(jīng)不同濃度的LPS和/或化合物處理24小時后，用ELISA或Griess法檢測上清液中NO、TNF-α和/或IL-6等指標水平，確定LPS劑量并篩選較優(yōu)抗炎化合物。
　　結果：1、在合適LPS劑量范圍內，暴露于LPS的RAW264.7細胞中NO、TNF-α和IL-6顯著升高，且呈劑量依賴性。2、篩選出白藜蘆醇(Res)和紫草素(Shik

3、)等7種較優(yōu)抗炎化合物，均能顯著下調NO和TNF-α表達。3、Res和Shik劑量依賴地下調NO和TNF-α表達。
　　結論：1、篩選出7種較優(yōu)抗炎化合物;2、Res和Shik具有較好劑量依賴抗炎效果。
　　第二部分白藜蘆醇(Res)減輕炎癥作用并減少RAW264.7細胞中LPS誘導的HMGB1和TLR4的表達。
　　目的：研究Res抗炎作用及機制。
　　方法：暴露于不同劑量LPS24小時的RAW264.7細胞，

4、同時經(jīng)Res或不經(jīng)Res處理后用ELASA或Griess法測定上清液中TNF-α、IL-6、NO水平，并用qRT-PCR及Western Blot試驗檢測HMGB1和TLR4表達。
　　結果：1、Res顯著減少IL-6，NO和TNF-α表達。2、Res顯著減少HMGB1和TLR4表達。
　　結論：1、Res能阻斷LPS誘導RAW264.7細胞的炎癥效應。2、HMGB1表達下調是Res的作用機制之一。3、Res也可影響HMGB

5、1-TLR4信號通路。
　　第三部分紫草素(Shik)通過IFN-β和NF-κB信號通路抑制LPS誘導的RAW264.7細胞HMGB1的釋放。
　　目的：研究Shik的抗炎作用及機制。
　　方法：暴露于不同劑量LPS24小時的RAW264.7細胞，同時經(jīng)Shik或不經(jīng)Shik處理后用ELISA或Griess法測定上清液中TNF-α、IL-6、NO水平，并用qRT-PCR、ELISA或Western Blot試驗檢測HM

6、GB1、IFN-β和細胞核對細胞質NF-κB比率表達。
　　結果：1、Shik能顯著減少IL-6，NO和TNF-α表達。2、Shik顯著減少LPS組HMGB1、IFN-β表達和細胞核對細胞質NF-κB蛋白表達比率。3、IFN-β信號分子JAK和NF-κB抑制劑顯著減少HMGB1表達。
　　結論:1、Shik拮抗LPS引起RAW264.7細胞炎癥應答;2、下調HMGB1表達是Shik抗炎機制之一，這與IFN-β和NF-κB信號

7、通路有關。
　　第四部分白藜蘆醇(Res)和紫草素(Shik)通過調節(jié)HMGB1發(fā)揮抗炎作用的體內研究
　　目的：研究Res和Shik在肝衰竭小鼠抗炎作用。
　　方法：用H&E染色觀察半乳糖胺(GalN)/LPS急性肝衰竭小鼠肝損傷情況，檢測血清ALT/AST，和用ELISA檢測HMGB1水平。
　　結果：1、GalN/LPS組ALT/AST顯著升高，且肝損傷明顯。2、與模型組相比，Res治療組ALT/AST未顯