黃芩苷對大鼠胰腺纖維化的保護(hù)作用.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)采用二乙基二硫代氨基甲酸鹽(DDC)致大鼠胰腺纖維化模型，比較加入黃芩苷后胰腺組織TGF-β1、CTGF、Fn蛋白表達(dá)量的變化，并觀察大鼠胰腺組織病理情況，從胰腺組織TGF-β1、CTGF、Fn的蛋白表達(dá)量及病理學(xué)改變兩方面探討黃芩苷干預(yù)實(shí)驗(yàn)研究大鼠胰腺纖維化形成的機(jī)制與作用。
　　 方法：47只SPF級雄性SD大鼠隨機(jī)分為5組(A組：空白組、B組：模型組、C組：小劑量黃芩苷組、D組中劑量黃芩苷組、E組大劑量黃芩苷組

2、)，B、C、D、E組用二乙基二硫代氨基甲酸鹽(DDC)每周(周一、周四)腹腔注射兩次，每次劑量為750mg/kg，共注射8次。A組每周兩次注射等劑量的生理鹽水，共注射8次。造模后第3周C、D、E組每日用不同劑量(25、50、100 mg/kg)的黃芩苷腹腔注射，B組注射生理鹽水作為對照，造模及給藥期間各組均予常規(guī)飼料。于造模開始后第6周實(shí)驗(yàn)結(jié)束前一天將各組大鼠禁食12個小時，心臟采血后處死，打開腹腔收集新鮮胰腺組織經(jīng)生理鹽水漂洗，肉眼觀

3、察胰腺組織改變后用4％的多聚甲醛液固定，常規(guī)石蠟包埋切片。放射免疫法和酶動力法檢測血清透明質(zhì)酸(HA)和淀粉酶，HE染色觀察大鼠胰腺組織的病理學(xué)變化，免疫組化分析大鼠胰腺組織中的轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β1、CTGF、Fn含量，光鏡下觀察照相。
　　 結(jié)果：
　　 1.黃芩苷對大鼠一般情況的影響空白組大鼠一般情況良好，飲食、活動、精神均正常，3周后體重明顯增加。模型組大鼠造模2周后大鼠多飲、少食、多尿、體重有所減輕，精神倦怠

4、，反應(yīng)較遲鈍，鼻腔內(nèi)有出血，皮毛疏松無光澤，大便糖稀，少數(shù)腹腔積液明顯，2只死于腹部積液量過多。各黃芩苷組早期進(jìn)食均減少，精神不佳，鼻腔內(nèi)均有出血，大便溏稀。給藥3周后進(jìn)食無明顯減少，精神、活動較正常，大便性狀無明顯改變。其中小、中劑量組分別有一只大鼠死于腹部注射部位撕咬，大劑量組一只大鼠造模后腹水過多經(jīng)抽腹水抗感染治療無效后死亡。
　　 2.胰腺組織病理形態(tài)學(xué)改變：HE染色鏡下改變。
　　 空白組：胰腺腺泡呈嗜堿性，腺

5、細(xì)胞為錐體形，泡漿豐滿，細(xì)胞核呈圓形位于基底部，細(xì)胞大小一致，排列整齊，胰腺小葉輪廓清晰，小葉問結(jié)締組織中可見胰導(dǎo)管及血管等，胰島圓潤飽滿。
　　 模型組：胰管擴(kuò)張，胰腺腺泡變形，水腫。小葉間纖維組織增生，大量炎細(xì)胞浸潤，小葉結(jié)構(gòu)消失，有的形成炎性包裹，部分腺體萎縮壞死代之以纖維瘢痕。
　　 小劑量黃芩苷組：可見胰腺腺泡水腫，但見散在壞死腺泡及炎性浸潤，小葉內(nèi)、小葉間腺泡組織局限性纖維化或無改變。
　　 中劑量組

6、：可見水腫的腺泡，小葉間少量炎細(xì)胞浸潤，小葉內(nèi)、小葉間腺泡組織少有纖維化改變。
　　 大劑量組：可見水腫的腺泡，浸潤的炎性細(xì)胞，部分小葉結(jié)構(gòu)消失，小葉內(nèi)、小葉間腺泡組織局限性纖維化或無改變。
　　 3.血清生化：淀粉酶各給藥組與模型組比較P＜0.05，各組與空白組比較P＜0.05，各給藥組見兩兩比較無差異。透明質(zhì)酸各組與空白組比較P＜0.01，各給藥組與模型組比較P＜0.05，各給藥組之間相互比較無差異。
　　

7、4.各組TGF-β1、CTGF、Fn蛋白表達(dá)量變化：TGF-β1、CTGF免疫組化標(biāo)記后，光鏡下可見模型組TGF-β1主要表達(dá)于間質(zhì)的纖維組織、成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿和細(xì)胞膜，呈棕黃或棕褐色。而空白組大鼠不表達(dá)或僅微弱地表達(dá)于間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)，呈淡黃色。CTGF在胰腺組織中主要分布于鄰近間質(zhì)區(qū)的部分腺上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和間質(zhì)的成纖維細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，以細(xì)胞漿染成棕黃或棕褐色為陽性表達(dá)。而空白組大鼠無或僅有極少量的CTGF在腺上皮細(xì)

8、胞的細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)。采用CMIA系列-多功能彩色病理圖像分析TGF-β1、CTGF表達(dá)程度，黃芩苷處理各組TGF-β1、CTGF蛋白表達(dá)量與模型組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，黃芩苷處理組間相互比較無差異。Fn免疫組化標(biāo)記后，光鏡下可見模型組Fn主要表達(dá)在小葉間及腺泡周圍纖維組織中，呈樹枝狀分布呈網(wǎng)格狀包繞腺泡，在小血管周圍和導(dǎo)管周圍也有少量表達(dá)，呈棕黃或棕褐色，并隨間質(zhì)病變程度的增加而增加?？瞻捉M大鼠較弱地表達(dá)于間質(zhì)中，呈淡黃

9、色。半定量分析其表達(dá)程度，黃芩苷處理各組Fn蛋白表達(dá)量與模型組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，黃芩苷各處理組間相互比較無差異。
　　 結(jié)論：
　　 1.腹腔內(nèi)反復(fù)注射DDC后通過氧化刺激使胰腺組織內(nèi)氧自由基增高而激活胰腺星狀細(xì)胞(PSCs)制造大鼠慢性胰腺炎胰腺纖維化模型。
　　 2.造模后胰腺外分泌功能下降，而黃芩苷處理組淀粉酶和模型組比較明顯升高表明黃芩苷有改善胰腺外分泌功能的作用。造模后透明質(zhì)酸含量