水泡性口炎病毒新型突變株的構(gòu)建及毒性的研究.pdf

1、弱毒疫苗和滅活疫苗是目前人和動物傳染病預(yù)防的兩種最主要方式。利用弱化的活病毒作為載體表達(dá)外源抗原，可高效而全面地激發(fā)機(jī)體免疫應(yīng)答，是有前途的疫苗研制方式。
　　水泡性口炎病毒（VSV）是一種良好的病毒載體，動物體內(nèi)的研究表明，表達(dá)外源蛋白的重組VSV病毒可有效激發(fā)機(jī)體體液免疫和細(xì)胞免疫，提供較全面和持久的保護(hù)。然而，目前制約VSV載體進(jìn)入實(shí)際應(yīng)用的一個(gè)關(guān)鍵問題是其安全性，試驗(yàn)表明，在高劑量接種VSV后，小鼠可表現(xiàn)出神經(jīng)毒性，出現(xiàn)諸

2、如后肢麻痹等癥狀，因此，野生型的VSV疫苗載體仍然需要進(jìn)一步地改造，以提高其使用的安全性。
　　M蛋白作為VSV的重要毒力因子，與VSV的致病性形成密切相關(guān)，有研究表明：自然情況下，存在一種VSV突變體，其M蛋白上第51位氨基酸（甲硫氨酸）突變?yōu)榫彼?，這種突變型VSV的致病性減低。目前研究的一個(gè)不足是，對VSV致病機(jī)理及M蛋白在其中意義的研究數(shù)據(jù)幾乎完全來源于小鼠。
　　豬是VSV的天然宿主之一，本試驗(yàn)研究了M蛋白第51位

3、氨基酸發(fā)生缺失的重組水泡性口炎病毒（VSVΔM51）對豬的致病性和免疫原性。結(jié)果表明，相比野生型VSV，接種VSVΔM51后動物臨床癥狀明顯減輕；抗體中和的檢測顯示，VSVΔM51可有效地激發(fā)本體動物的免疫應(yīng)答，有希望成為一個(gè)有效的預(yù)防豬VSV的候選疫苗載體。
　　由于VSVΔM51仍然具有一定毒性，利用重組DNA技術(shù)，本試驗(yàn)又構(gòu)建了M蛋白三位點(diǎn)發(fā)生突變的新型重組VSV病毒（VSV-MT），突變的位點(diǎn)包括：M蛋白第51，221位和

4、226位氨基酸。在此基礎(chǔ)上，本試驗(yàn)對新病毒進(jìn)行了體外和體內(nèi)生物學(xué)特性的鑒定，包括體外病毒多步生長曲線，病毒在動物體內(nèi)的致病性和免疫原性等。體外病毒多步生長曲線結(jié)果表明，VSV-MT的增殖能力顯著弱于野生型VSV病毒（VSVXN2）。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，以體重變化和組織病毒載量等為指標(biāo)，較之野生型VSV病毒和VSVΔM51病毒，VSV-MT顯著弱化。
　　病毒在毒性弱化后，通常會出現(xiàn)免疫原性的減弱，因此，本試驗(yàn)對弱化的VSV-MT的接種動物