生長抑制素基因工程亞單位疫苗對小鼠生長的影響.pdf

1、構(gòu)建帶有生長抑制素的pET-32a-2SS28-SS14和pET-32a-3SS28原核表達(dá)質(zhì)粒并檢測其在大腸桿菌中的表達(dá)，并用所表達(dá)的目的蛋白制成生長抑制素亞單位疫苗，將該疫苗免疫小鼠，研究其對小鼠生長的影響，探討生長抑制素亞單位疫苗免疫小鼠后對促進(jìn)生長效果的性別差異性，并研究生長抑制素不同亞型串聯(lián)后對促進(jìn)小鼠生長的不同效果。為研究獲得經(jīng)濟(jì)高效的生長抑制素亞單位疫苗，以提高經(jīng)濟(jì)動物的生產(chǎn)效率。
　　1.pET-32a-2SS28

2、-SS14和pET-32a-3SS28原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
　　選用生長抑制素的兩種亞型SS-14和SS-28，將其混合串聯(lián)到pET-32a表達(dá)系統(tǒng)中，得到pET-32a-2SS28-SS14和pET-32a-3SS28兩種重組質(zhì)粒。并通過PCR擴(kuò)增和測序鑒定表明，目的基因在pET-32a質(zhì)粒中的插入位點(diǎn)，序列以及方向完全正確。
　　2.2SS28-SS14和3SS28目的蛋白的表達(dá)與純化
　　將pET-32a-2SS2

3、8-SS14和pET-32a-3SS28兩種重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到E.coliBL21 De3中，通過IPTG誘導(dǎo)大腸桿菌介導(dǎo)表達(dá)出目的蛋白，并通過western blot分析鑒定，所表達(dá)蛋白為目的蛋白。將菌體超聲破碎后離心對目的蛋白進(jìn)行可溶性分析以后，將上清進(jìn)行蛋白純化，獲得純化的目的蛋白。
　　3.生長抑制素亞單位疫苗的制備以及動物免疫
　　將誘導(dǎo)純化的目的蛋白與佐劑混合乳化制成生長抑制素亞單位疫苗，免疫小鼠，選用4周齡離乳昆明

4、鼠60只，雌雄各半。將雌雄各隨機(jī)分3組，每組10只，對每只做好編號標(biāo)記。按如下分組進(jìn)行免疫：2SS28-SS14♀：免疫2SS28-SS14蛋白的雌鼠；2SS28-SS14♂：免疫2SS28-SS14蛋白的雄鼠；328AA♀：免疫3SS28蛋白的雌鼠；328AA♂：免疫3SS28蛋白的雄鼠；空白♀：注射生理鹽水白油乳化溶液的雌鼠；空白♂：注射生理鹽水白油乳化溶液的雄鼠。對4周齡的小鼠初始體重的測定記錄，并對其進(jìn)行首次免疫。實(shí)驗(yàn)組每只小鼠

5、免疫100ug蛋白量的相應(yīng)劑量疫苗，對照組注射等劑量的生理鹽水白油乳化溶液對照。1周后再進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫，實(shí)驗(yàn)組每只小鼠免疫50ug蛋白量的相應(yīng)劑量疫苗，對照組注射等劑量的生理鹽水白油乳化溶液對照。從4周齡開始到7周齡，每周對小鼠體重做一次稱重記錄。采用SPSS進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。免疫兩種疫苗的雌鼠的實(shí)驗(yàn)組與空白對照組平均增重相比，差異均不顯著（P>0.05）。免疫3SS28疫苗的雄鼠實(shí)驗(yàn)組與空白對照組平均增重相比，免疫后第1、第2周體重增

6、加不顯著（p>0.05），第3周平均增重顯著高于空白對照組（P<0.05）。免疫2SS28-SS14疫苗的雄鼠實(shí)驗(yàn)組與空白對照組平均增重相比，免疫后第1、第2周平均增重顯著高于空白對照組（p<0.05）,第3周差異極為顯著（P<0.01）。說明生長抑制素不同亞型的亞單位疫苗對昆明鼠生長影響性別差異性較大；從雄鼠的增重效果來看，SS-14亞型的免疫增重效果優(yōu)于SS-28亞型，說明生長抑制素不同亞型的免疫原性有所差異，導(dǎo)致免疫效果的不同。<

7、br>　　綜上所述，本研究通過基因克隆技術(shù)成功重組構(gòu)建pET-32a-2SS28-SS14和pET-32a-3SS28原核表達(dá)質(zhì)粒并檢測其在大腸桿菌中表達(dá)。并將表達(dá)的目的蛋白純化后制備成生長抑制素亞單位疫苗免疫小鼠，發(fā)現(xiàn)免疫3SS28疫苗的雄鼠實(shí)驗(yàn)組與空白對照組平均增重相比差異顯著（P<0.05）。免疫2SS28-SS14疫苗的雄鼠實(shí)驗(yàn)組與空白對照組平均增重相比差異極為顯著（P<0.01）。而兩種疫苗對雌鼠均無明顯差異性。因此本次研究為