單純皰疹病毒Ⅰ型VP26蛋白在病毒感染過程中的分子生物學功能分析.pdf

1、單純皰疹病毒Ⅰ（HSV-1）是一種結構復雜的雙鏈DNA病毒，具有較強傳染性，在細胞內的復制過程中與宿主細胞之間表現(xiàn)有多種相互作用。HSV-1與細胞的相互作用是研究HSV-1感染不同細胞后會形成不同的感染過程及結果的基礎。以這個角度來看，對于病毒蛋白及其細胞作用蛋白在病毒感染周期中的功能分析，在探索細胞對病毒感染產生相應反應的機理，和由此機理所導致的各種可能的生物學意義，以及由此確定的臨床治療或診斷方法等領域內的應用都具有很大的意義。

2、r>　　 HSV-1VP26是核衣殼組成中最小的蛋白，其功能至今尚未闡明。本實驗的研究重點是分析在病毒感染周期中病毒核衣殼蛋白VP26的功能及尋找與其相互作用的細胞蛋白。首先構建了UL35-EGFP重組病毒，利用該重組病毒與野毒株的生長曲線的差異分析，發(fā)現(xiàn)重組病毒出現(xiàn)了出胞膜阻滯的現(xiàn)象，提示VP26的功能可能與病毒感染周期中的出質膜環(huán)節(jié)相關。隨后通過酵母雙雜交系統(tǒng)篩查到VP26和細胞膜上的蛋白——CMTP-7有相互作用，免疫共沉淀和雙

3、熒光細胞共定位分析驗證了二者在完整細胞中存在生理性相互作用。隨后采用siRNA技術和實時定量PCR方法進行了進一步的研究，在敲除CMTP-7蛋白的細胞內，病毒復制裝配未受影響，但出現(xiàn)病毒出胞阻滯的現(xiàn)象，檢測病毒滴度發(fā)現(xiàn)病毒生長量低于正常細胞內的所得數(shù)量，運用透射電鏡也觀察到了在近細胞膜的胞質外圍處出現(xiàn)了堆積成團的病毒。而流式細胞儀分析發(fā)現(xiàn)在病毒出細胞時CMTP-7也隨之減少。這些結果表明CMTP-7的功能和HSV-1出質膜這一過程相關。

4、HSV-1在CMTP-7蛋白敲除的細胞內和UL35-EGFP重組病毒在正常細胞內所表現(xiàn)出的特性極為相似。
　　 以上結果強烈提示二者通過相互作用在完成同一項功能。即VP26具有與病毒包膜化和有效出胞膜的相關功能，并且是通過CMTP-7相互作用來完成這一對病毒感染周期至關重要的過程。而在熒光顯微鏡下還觀察到，CMTP-7可以隨病毒再次感染其它細胞。并且在新生病毒粒上檢測出了CMTP-7蛋白。這些結果似乎表明CMTP-7和VP26作