油菜根系分泌物和葉片胞間液的蛋白組學(xué)分析.pdf

1、植物根系分泌物，即植物根系分泌到其生長基質(zhì)中的物質(zhì)，是植物與土壤微環(huán)境進(jìn)行物質(zhì)、能量和信息交流的重要媒介。植物根系分泌蛋白有可能在調(diào)節(jié)根際微環(huán)境方面起著關(guān)鍵作用。開展對油菜根系分泌蛋白的研究有助于了解植物體對生長環(huán)境的調(diào)節(jié)適應(yīng)機(jī)制。
　　植物胞間液或間質(zhì)液，即植物細(xì)胞之間的液體，作為細(xì)胞原生質(zhì)體與環(huán)境之間溝通的橋梁，對細(xì)胞的生長代謝有重要意義。胞間液中的蛋白質(zhì)，表現(xiàn)出胞間液多種生理生化功能。對植物胞間液中蛋白的解析向植物逆境生理領(lǐng)

2、域提供了新的視角。
　　本研究以甘藍(lán)型油菜“鼎油雜4號”為實(shí)驗(yàn)材料，建立和優(yōu)化了植物根系分泌物和胞間液蛋白的收集和制備方法，利用以雙向電泳和質(zhì)譜為主要技術(shù)的蛋白質(zhì)組學(xué)分析平臺，進(jìn)行油菜根系分泌蛋白和葉片胞間液蛋白相關(guān)研究。取得的主要研究結(jié)果如下：
　　1、優(yōu)化了適用于收集油菜根系分泌物的幼苗無菌水溶液培養(yǎng)及檢測體系。在油菜幼苗無菌水溶液培養(yǎng)方法基礎(chǔ)上，將培養(yǎng)與無菌檢測同時進(jìn)行，簡化了操作步驟，縮短了實(shí)驗(yàn)周期，降低了污染率。<

3、br>　　2、優(yōu)化了根系分泌蛋白提取方法。針對根系分泌蛋白含量低、次生化合物較多的特點(diǎn)，改進(jìn)了三氯醋酸-丙酮蛋白提取方法，引入了月硅酸鈉鹽作為蛋白沉淀載體，獲得了較好的蛋白提取效果。
　　3、利用以雙向電泳和質(zhì)譜鑒定為核心的蛋白質(zhì)組學(xué)分析平臺，對油菜根系分泌蛋白進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析。利用雙向電泳技術(shù)，對根系分泌蛋白進(jìn)行分離，獲得了背景清晰的油菜根系分泌蛋白表達(dá)圖譜。利用MALDI-TOF-MS/MS技術(shù)和生物信息學(xué)方法，進(jìn)行蛋白同源

4、性分析，鑒定出11種蛋白，結(jié)合相關(guān)蛋白數(shù)據(jù)庫和文獻(xiàn)對其生理、生化功能進(jìn)行查詢，表明多數(shù)根系分泌蛋白與植物次生代謝或防御相關(guān)。
　　4、初步建立了油菜葉片胞間液的制備方法?；跐B透-離心方法，利用雙離心管裝置提取油菜葉片胞間液。葉綠素濃度測定實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：植物胞間液葉綠素濃度低于全葉片中葉綠素濃度的3％。
　　5、對油菜葉片胞間液蛋白進(jìn)行雙向電泳分離，獲得了背景清晰的雙向電泳分離圖譜。利用圖像分析軟件對低磷脅迫下油菜葉片胞間液