銅綠假單胞菌外膜耐藥和保護(hù)原功能蛋白組學(xué)的研究.pdf

1、銅綠假單胞菌是人類的機(jī)會(huì)致病茵，極少感染健康個(gè)體，但對(duì)免疫缺陷者，如燒傷、艾滋病、癌癥或囊性纖維化等患者則有較高的感染率。銅綠假單胞菌具有內(nèi)在的耐藥性，該菌的耐藥機(jī)制以及相關(guān)疫苗的開發(fā)一直以來都備受研究人員的重視。 本文運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)特別是免疫蛋白質(zhì)組學(xué)的方法對(duì)銅綠假單胞菌的外膜蛋白進(jìn)行了研究，對(duì)其進(jìn)行分離和鑒定，在此基礎(chǔ)上分析了耐藥株外膜蛋白的表達(dá)變化以及銅綠假單胞菌外膜免疫原性蛋白。 首先，我們用月桂酰肌氨酸鈉的方法

2、提取了銅綠假單胞菌的外膜蛋白，對(duì)其進(jìn)行了2-DE，并通過質(zhì)譜分析鑒定了其中26個(gè)外膜蛋白，構(gòu)建了銅綠假單胞菌外膜蛋白的分子表達(dá)圖譜，為下一步的研究奠定了基礎(chǔ)。 然后，通過藥物選擇獲得銅綠假單胞菌5種不同藥物的耐藥株，進(jìn)而對(duì)耐藥株的外膜蛋白質(zhì)組進(jìn)行系統(tǒng)比較，共鑒定出8種耐藥相關(guān)外膜蛋白質(zhì)，包括紅霉素耐藥株1種，氯霉素和巴洛沙星耐藥株各有2種，頭胞曲松鈉耐藥株有4種，氨芐青霉素耐藥株有5種。在這8種變化的蛋白質(zhì)中，OprD為銅綠假單

3、胞菌對(duì)氯霉素、氨芐青霉素、頭胞曲松鈉及巴洛沙星共同變化的蛋白質(zhì)，OprF、OmpH1、MexA是銅綠假胞菌對(duì)氨芐青霉素和頭胞曲松鈉共同變化的蛋白質(zhì)。這種耐藥性研究的方法和規(guī)模在國內(nèi)外尚未見報(bào)道。 最后，我們應(yīng)用免疫蛋白質(zhì)組學(xué)的方法，即雙向電泳與Western blot相結(jié)合，繼之于MALDI-TOF-MS分析的方法，發(fā)現(xiàn)了銅綠假單胞菌外膜蛋白中的8個(gè)免疫原性蛋白質(zhì)。在對(duì)這8個(gè)蛋白進(jìn)行克隆表達(dá)及純化后，進(jìn)行小鼠免疫和攻毒實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)