天皰瘡抗體滴度與疾病活動(dòng)性及CD19、CD20的相關(guān)性研究.pdf

1、背景:
　　 天皰瘡是一組以天皰瘡抗體介導(dǎo)的器官特異性自身免疫性疾病,發(fā)病率雖然很低,但呈上升趨勢。好發(fā)于30-50歲中年人群,無明顯性別差異。臨床上主要分為四型:尋常型、增殖型、落葉型、紅斑型,但四型之間可相互轉(zhuǎn)化。此外,還有皰疹樣天皰瘡、IgA天皰瘡、藥物誘發(fā)的天皰瘡、副腫瘤性天皰瘡、流行性性天皰瘡(又名巴西天皰瘡)等亞型。該組疾病的共同特征有:臨床表現(xiàn)為皰壁薄、松弛易破的水皰或大皰形成；組織病理為棘層松解所致表皮內(nèi)水皰形成

2、；直接免疫熒光檢查(indirect immunofluorescence,IIF)可見棘層細(xì)胞間IgG和C3沉積,取患者血清做間接免疫熒光檢查,可顯示血清中有抗表皮棘細(xì)胞間物質(zhì)抗體。
　　 天皰瘡的發(fā)病機(jī)理尚未完全清楚。越來越多研究認(rèn)為在天皰瘡發(fā)病過程中,T細(xì)胞和B細(xì)胞相互作用、相互影響,產(chǎn)生針對(duì)自身細(xì)胞間物質(zhì)的抗體,從而導(dǎo)致疾病的發(fā)生。天皰瘡的抗原主要集中在橋粒,橋粒是角質(zhì)形成細(xì)胞間連接的主要結(jié)構(gòu),由相鄰細(xì)胞的細(xì)胞膜發(fā)生卵圓

3、形致密增厚而共同構(gòu)成。由兩類蛋白質(zhì)構(gòu)成:一類是跨膜蛋白,位于橋粒芯(desmosomal core),主要由橋粒芯蛋白(desmoglein,Dsg)和橋粒芯膠蛋白(desmocollin,Dsc)構(gòu)成,它們形成橋粒的電子透明細(xì)胞間隙和細(xì)胞間接觸層；另一類為胞質(zhì)內(nèi)的橋粒斑(desmosomal plaque)蛋白,是盤狀附著板的組成部分,主要成分為橋粒斑蛋白(desmoplakin,DP)和橋粒斑珠蛋白(plakogloubin,PG)

4、。天皰瘡抗體(Pemphigusantibody)與抗原結(jié)合后,通過細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑激活一系列蛋白水解酶,導(dǎo)致細(xì)胞間鏈接結(jié)構(gòu)水解,從而引起表皮棘層細(xì)胞相互分離、棘層松解及表皮內(nèi)水皰形成。鈣粘素是Ca2+依賴的細(xì)胞間連接分子,它對(duì)表皮細(xì)胞間粘附連接起重要作用。天皰瘡抗原的c DNA序列與鈣粘素有明顯的同源性,因此天皰瘡抗體也損害了表皮細(xì)胞間的粘連功能,導(dǎo)致棘層松解。棘層松解在PF患者較表淺,損害僅達(dá)表皮顆粒層。而在PV患者則深達(dá)表皮生發(fā)層

5、。幾乎所有天皰瘡患者免疫病理均示角質(zhì)形成細(xì)胞間IgG和C3呈網(wǎng)狀沉積。
　　 天皰瘡的診斷主要結(jié)合四個(gè)方面因素考慮:1、典型的臨床皮損表現(xiàn)；2、皮膚組織病理所示的棘層松解；3、免疫病理示角質(zhì)形成細(xì)胞間IgG和C3呈網(wǎng)狀沉積；4、組織上發(fā)現(xiàn)患者血清中或原位皮膚存在自身抗橋粒芯糖蛋白抗體。目前天皰瘡治療方法很多,但皮質(zhì)類固醇激素仍是目前的首選,開始劑量需較大,以期在1-2周內(nèi)抑制新的水皰形成,必要時(shí)可應(yīng)用皮質(zhì)類固醇激素沖擊療法或加用

6、免疫抑制劑治療。根據(jù)患者皮損面積分為輕、中、重度并給與適合劑量的激素,以不出現(xiàn)新的水皰為宜。皮損面積<體表面積10％為輕度,激素量為30mg/d；體表面積30％<皮損面積<體表面積50％為中度,激素量為60-80 mg/d；皮損面積>體表面積50％為重度,激素量>80 mg/d。此外,部分皮損面積很局限的天皰瘡患者在口服少量激素的同時(shí)加用激素軟膏或他克莫司軟膏外用可促進(jìn)皮損的愈合。
　　 但目前天皰瘡診治中最大的問題是明確診斷和

7、判斷疾病的活動(dòng)程度及預(yù)后。尼氏征對(duì)于天皰瘡的診斷具有較高的特異性,但其敏感性較差。直接免疫熒光(direct immunofluorescence,DIF)檢查是診斷天皰瘡的金標(biāo)準(zhǔn),但反復(fù)的皮膚活檢術(shù)給病人造成較大的痛苦,難以為廣大的患者所接受,也難以作為隨訪的標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)已知的天皰瘡發(fā)病機(jī)制,本實(shí)驗(yàn)嘗試檢測血循環(huán)中的天皰瘡抗體對(duì)天皰瘡患者進(jìn)行診斷,并探討其與疾病的活動(dòng)性的關(guān)系,以尋找出適合臨床診斷、判斷療效和隨訪的指標(biāo)。
　　

8、目的:
　　 1、通過酶聯(lián)免疫吸附(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測天皰瘡患者血清中的抗體IgG滴度,了解其敏感性和特異性。
　　 2、對(duì)天皰瘡患者的病情活動(dòng)度進(jìn)行評(píng)分,探討其與天皰瘡抗體滴度的相關(guān)性。
　　 3、通過流式細(xì)胞儀(Flow cytometry,FCM)檢測天皰瘡患者血清中CD19、CD20的表達(dá)水平,探討天皰瘡抗體滴度與CD19、CD20表達(dá)水平

9、的相關(guān)性。
　　 方法:
　　 l、收集2009-1至2010-2之間門診及住院并確診的38例天皰瘡患者及非天皰瘡患者22人的血清,離心后用天皰瘡抗體檢測試劑盒(MBL公司),通過ELISA法檢測60份血清中天皰瘡抗體IgG的滴度。了解該方法與臨床的相符性,并探討其敏感性和特異性。
　　 2、對(duì)確診的天皰瘡患者進(jìn)行病情活動(dòng)度評(píng)分,分析疾病病情活動(dòng)評(píng)分與天皰瘡抗體滴度進(jìn)行相關(guān)性。
　　 3、將38例天皰瘡患

10、者中的28位患者的血清經(jīng)流式細(xì)胞技術(shù)檢測其中CD19、CD20的表達(dá)水平,并與之前檢測的相應(yīng)的天皰瘡抗體滴度進(jìn)行多元相關(guān)性分析。
　　 結(jié)果:
　　 1、診斷的符合度、敏感性和特異性:38例天皰瘡患者中有37例陽性,1例陰性。22例非天皰瘡患者則均為陰性。該方法的診斷符合率為98.3％,敏感性為97.4％,特異性為100％。
　　 2、病情活動(dòng)度評(píng)分與天皰瘡抗體滴度的Pearson雙變量相關(guān)性分析:病情活動(dòng)度評(píng)分

11、與天皰瘡抗體滴度之間的相關(guān)性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001),相關(guān)系數(shù)r=0.671,直線回歸方程為:病情活動(dòng)評(píng)分=1.079+0.671×抗體滴度。
　　 3、天皰瘡抗體滴度與血清CD19、CD20表達(dá)水平的多元回歸分析:天皰瘡抗體滴度與血清CD19、CD20表達(dá)水平的的相關(guān)性亦具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),將數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后,其復(fù)相關(guān)系數(shù)R=0.55,R2=0.302,IgCD19(x1)的偏回歸系數(shù)為0.518,IgC

12、D20(x2)的偏回歸系數(shù)為0.066,截距為1.674,得出回歸方程為:Lg抗體滴度=1.674+0.518×LgCD19+0.066×LgCD20。
　　 結(jié)論:
　　 1、該實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了天皰瘡抗體用于天皰瘡的診斷具有較高的敏感性及特異性,與臨床符合率較高,對(duì)疾病的診斷具有重要的意義。
　　 2、天皰瘡抗體抗體滴度越高,疾病的活動(dòng)性越強(qiáng),與疾病活動(dòng)度相平行,具有較高的相關(guān)性。可用于疾病活動(dòng)度的判斷、治療效