1型糖尿病小鼠胰島細胞、淋巴細胞表達的改變及血清Ins、TNF-α、IL-10水平變化的研究.pdf

1、目的:研究1型糖尿病(type1diabetesmellitus,T1DM)小鼠胰島B細胞、A細胞、白細胞介素-5(interleukin-5,IL-5)陽性細胞、CD3、CD57陽性細胞表達改變及血清中胰島素(insulin,Ins)、腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactor,TNF)-α、IL-10水平的變化,為進一步探討T1DM發(fā)病機制及為臨床治療提供依據(jù)。
　　方法:正常雄性C57BL/6J小鼠104只,隨機分

2、為3組:實驗組、鹽水對照組和正常對照組。1.模型建立:采用連續(xù)多次小劑量鏈脲佐菌素給藥法(multiplelow-doseofstreptozotocin,MLDSTZ)。分別于注射后第3d、7d、10d、14d、21d及28d檢測小鼠的空腹血糖、體重。2.取血清及胰腺組織,應(yīng)用免疫組織化學SABC單染、鄰片單染雙標記、圖像分析、形態(tài)計量法及酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)進行

3、研究。
　　結(jié)果:1.與正常及鹽水對照組比較,小鼠空腹血糖水平從實驗14d組開始明顯升高(P﹤0.01),以28d組最高;實驗組小鼠的體重與對照組比較無顯著性差異。2.實驗組胰島面積有所減小。胰島B細胞在實驗10d、14d、21d組染色加深,免疫反應(yīng)強度增強,平均灰度值降低(P﹤0.01);B細胞的面數(shù)密度(NA)從第7d開始減小,呈逐漸下降趨勢,與正常及鹽水對照組比較有顯著性差異(P﹤0.01)。3.胰島A細胞在實驗7d、21d

4、、28d組免疫染色強度有所減弱,平均灰度值升高(P﹤0.05);7d以后細胞NA增大,與正常及鹽水對照組比較有顯著性差異(P﹤0.01);A細胞除分布于胰島周邊,也可見于胰島中央。4.胰島IL-5陽性細胞在實驗3d、7d組免疫染色強度有所減弱,平均灰度值升高(P﹤0.01),其余時間點無明顯變化。IL-5陽性細胞的NA及分布的變化與A細胞基本一致。經(jīng)鄰片單染雙標法顯示,胰島中多數(shù)IL-5陽性細胞與A細胞位置相同。5.CD3陽性細胞散在分

5、布于胰島內(nèi),實驗3d開始NA逐漸增大,以14d組最大,之后有所減小,除28d組外,均大于對照組,比較有顯著性差異(P﹤0.01)。6.正常及鹽水對照組CD57陽性細胞主要分布于胰島周邊,實驗組CD57陽性細胞除分布于胰島周邊,還可見于胰島中央。NA從實驗3d開始增大,以14d組最大,之后有所減小,均高于對照組,比較有顯著性差異(P﹤0.01)。7.ELISA法檢測血清結(jié)果顯示,與對照組相比,血清Ins濃度從實驗7d后均處于較低水平;實驗

6、組血清TNF-α濃度處于下降趨勢但均高于對照組,差異具有統(tǒng)計學意義(P﹤0.05);實驗組IL-10濃度較對照組顯著降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P﹤0.05)。
　　結(jié)論:1.成功制備T1DM小鼠模型。2.T1DM發(fā)生時,實驗組胰島面積有所減小,表達Ins的B細胞數(shù)量減少,合成和分泌Ins總量減少,Ins表達下調(diào),血清Ins水平下降。3.胰島A細胞和IL-5陽性細胞數(shù)量增多,變化趨勢相似,IL-5定位于胰島A細胞。胰高血糖素(glu