靜脈移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療脊髓.pdf

1、脊髓損傷常導(dǎo)致?lián)p傷平面以下感覺(jué)、運(yùn)動(dòng)功能不可逆、永久性喪失，給患者造成極大傷害，給家庭及社會(huì)造成極大負(fù)擔(dān)。中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后，軸突所處的微環(huán)境比軸突本身更影響其再生。細(xì)胞移植可替代丟失的神經(jīng)細(xì)胞，它分泌的各種神經(jīng)生長(zhǎng)因子可促進(jìn)軸突的再生，橋接神經(jīng)缺損后遺留的空隙，改善CNS的軸突再生環(huán)境，為軸突的生長(zhǎng)提供物理支架，符合聯(lián)合治療脊髓損傷理念，因此細(xì)胞移植成為目前脊髓損傷修復(fù)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)。 研究目的：研究靜脈移植BMSC對(duì)脊髓損傷

2、的修復(fù)作用。 方法：(1)體外分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增、純化、BrdU標(biāo)記10只同種異體SD大鼠的BMSC。(2)WD法制成同種大鼠脊髓損傷完全癱瘓動(dòng)物模型，制模后7天隨機(jī)分為A、B、C三組，A組18只，作為BMSC移植組，B組16只，作為對(duì)照組，C組12只，作為空白手術(shù)對(duì)照組。(3)A組經(jīng)鼠尾靜脈移植2×106/ml的BMSC細(xì)胞懸液1ml，B組移植1mlL-DMEM液，C組作為空白手術(shù)對(duì)照組。(4)組織學(xué)及免疫組織化學(xué)觀察移植后2、

3、3、6w檢測(cè)BMSC在損傷段脊髓的存活、分布、分化，檢測(cè)損傷段脊髓內(nèi)GAP-43、NF及巢蛋白的表達(dá)，移植后每周用BBB評(píng)分評(píng)估各組后肢運(yùn)動(dòng)功能。 結(jié)果：BMSC能在體外大量擴(kuò)增、經(jīng)6次傳代后，無(wú)細(xì)胞衰老征象。移植后2wBMSC主要分布于損傷段及鄰近節(jié)段脊髓內(nèi)，約占移植細(xì)胞數(shù)的4.9％，移植后6、8w，細(xì)胞數(shù)量明顯減少，但仍可檢測(cè)到存活的BMSC。移植后2w，BMSC形態(tài)大多變?yōu)閳@形或橢圓形，部分陽(yáng)性標(biāo)記的細(xì)胞長(zhǎng)出神經(jīng)元樣突起，

4、約12.6％表達(dá)星形膠質(zhì)細(xì)胞特異性蛋白GFAP，約5.4％表達(dá)神經(jīng)元特異性核蛋白NeuN。移植后3w開(kāi)始A組的BBB評(píng)分在各觀察時(shí)間點(diǎn)明顯高于B組、C組，移植后6周維持在較穩(wěn)定水平，而B(niǎo)、C組在傷后3w開(kāi)始維持在較穩(wěn)定水平。GAP-43、NF的表達(dá)在移植后2、3、6w，A組明顯高于高于B組、C組，6w開(kāi)始下降，而B(niǎo)組與C組在移植后2、3、6w的表達(dá)均維持在相對(duì)衡定的水平。移植后2、3w，在脊髓損傷灶周圍，A組巢蛋白陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞數(shù)明顯高