Calpain2及自噬相關(guān)基因ATG7的表達在非酒精性脂肪性肝病中的作用.pdf

1、目的:研究Calpain2及自噬相關(guān)基因7(autophagy related gene7，ATG7)在非酒精性脂肪性肝病中的表達變化及意義。
　　方法:
　　(1)30只SD雄性大鼠隨機設(shè)立基礎(chǔ)飼料組(正常對照組，C組)，高脂飲食組(模型組，F(xiàn)組)，其中C組取8周時相點，F(xiàn)組應(yīng)用高脂飲食料喂養(yǎng)(基礎(chǔ)飼料87.5％，豬油10％，膽固醇2％，膽鹽0.5％)，建立非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liv

2、er disease,NAFLD)動物模型，并按時相點分為4周、8周、12周及16周組4個時相點，每時相點6只大鼠；(2)動態(tài)觀察各組：①血清游離脂肪酸(FFA)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶變化(AST)變化；②通過HE染色光鏡觀察肝臟脂肪變情況；③實時熒光PCR檢測Calpain2及ATG7mRNA的表達變化；④Western blot法檢測Calpain2及ATG7的蛋白表達變化。
　　結(jié)果:
　　①NAF

3、LD大鼠模型組各時相點血清游離脂肪酸(FFA)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平隨高脂飲食喂養(yǎng)時間延長呈上升趨勢，均較對照組有明顯升高，在16周組時分別為165.95±7.24 U/L、249.52±4.20 U/L、0.83±0.05mmol/L,與對照組比較均有顯著升高(P＜0.01)。②HE染色提示肝臟脂肪變程度隨高脂飲食喂養(yǎng)時間的延長而加重：C組大鼠肝臟結(jié)構(gòu)完整，形態(tài)規(guī)則，無明顯異常；F組肝臟在4周時為單純

4、性脂肪變階段，NAS積分2分，病理分級為1度脂肪變，8周時脂肪變加重，呈2度脂肪變，NAS積分4分，12周時有炎細胞浸潤，NAS積分6分，進展為非酒精性脂肪性肝炎(NASH)；16周為NASH基礎(chǔ)上伴肝纖維化，NAS積分9分；③real-time PCR檢測結(jié)果：以正常飲食組為對照組，肝組織Calpain2 mRNA相對表達量在高脂飲食喂養(yǎng)后開始上調(diào)，在16周時(9.83±0.85，P＜0.01)升高最為明顯；ATG7的mRNA相對表達

5、量在4周組(0.82±0.02)即開始下降，在16周組(0.20±0.03)降至最低，與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。④Western blot檢測結(jié)果顯示：與對照組相比，F(xiàn)組Calpain2蛋白相對表達水平與mRNA表達水平一致，4周組(2.32±0.45)時開始上調(diào)，16周組(9.87±1.20，P＜0.01)明顯上升。而ATG7的蛋白相對表達水平則隨肝臟脂肪變性的進展明顯下降，16周時降低最為顯著(0.18±0.05