應(yīng)用房室交界區(qū)組織學(xué)和Cx43的表達探討AVNRT發(fā)生機制.pdf

1、目的：通過對電生理刺激結(jié)果存在差異的標本的房室結(jié)交界區(qū)組 織形態(tài)學(xué)特征和連接蛋白43(Cx43)在其各個部位表達的觀察與檢測， 從電生理學(xué)、組織形態(tài)學(xué)和分子學(xué)三方面共同探討房室結(jié)折返性心動 過速(AVNRT)可能的發(fā)生機制。 方法：通過心電生理檢查首先將20只新西蘭大白兔分為兩組即有雙徑路組和無雙徑路組，前者在給予電生理刺激(包括心房遞增刺激、心房和心室的程控期前刺激)的過程中出現(xiàn)“跳躍現(xiàn)象”、蟬聯(lián)現(xiàn)象或折返波或能誘

2、發(fā)出房室結(jié)折返性心動過速，后者則不能。同時記錄傳導(dǎo)徑路的不應(yīng)期和AV間期。然后，取房室結(jié)標本，通過石蠟切片、常規(guī)HE染色后，觀察房室交界區(qū)及其周圍組織的形態(tài)學(xué)。同時，對雙徑路組和非雙徑路組的標本分別進行冰凍切片，切片過程中取相鄰3張分別行HE染色和免疫熒光染色及陰性對照，HE染色的目的是通過對組織形態(tài)學(xué)的觀察便于免疫熒光切片在激光掃描共聚焦顯微鏡下的解剖定位，免疫熒光方法是用來檢測房室交界區(qū)各個部位(主要是后延伸部、房室結(jié)、希氏束)Cx

3、43的表達，并應(yīng)用激光掃描共聚焦顯微鏡進行定量分析(測OD值，即熒光指數(shù))，最后運用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件分析對比，包括雙徑路組和非雙徑路組的組內(nèi)對比和兩組之間的組間對比。 結(jié)果： 1、電生理刺激：20例新西蘭大白兔經(jīng)過電生理刺激發(fā)現(xiàn)2例存在明顯跳躍現(xiàn)象，且存在蟬聯(lián)現(xiàn)象；2例在S <,1> S <,1>刺激中出現(xiàn)AV突然延長≥60ms；1例由室性早搏誘發(fā)出折返性室上性心動過速；2例誘發(fā)出心房纖顫，故雙徑路組5例，非

4、雙徑路組15例，發(fā)生率為25％。兩組AV間期有明顯差異，雙徑路組(50±7.07ms)短于非雙徑路組(63.3±6.17ms)(P<0.05)。雙徑路組快徑路的不應(yīng)期(115±12.91 ms)明顯長于短徑路(72.5±26.30 ms)(P<0.05)和非雙徑路的不應(yīng)期(70±14.14 ms)(P<0.01)，后二者無明顯差異(P>0.05)。 2．形態(tài)學(xué)： (1) 房室結(jié)由3層細胞組成，在房室結(jié)上部均與心房間隔肌相

5、連。淺層細胞束著色淺，細胞稀疏，排列無序，細胞短小，細胞核較小，深層細胞較致密，即致密結(jié)，染色較其他兩層深，細胞散在無規(guī)律，細胞邊界模糊不清，細胞質(zhì)染色淺淡，細胞核較大，呈圓形或橢圓形，細胞排列雜亂無章，低倍鏡下呈漩渦狀。中層細胞束特征介于二者之間。 (2)所有標本均有后延伸，后延伸的橫斷面積比房室結(jié)橫斷面積明顯減小，且越接近冠狀竇口橫截面積越小，形狀由房室結(jié)時的近似三角形逐漸變?yōu)闄E圓形，后延伸的細胞排列與致密結(jié)相比明顯稀疏，胞

6、質(zhì)染色較致密結(jié)淺，細胞細小，排列紊亂，大體形態(tài)和房室結(jié)的淺層和中層細胞相似。 3．免疫熒光：Koch三角標本經(jīng)冰凍切片后HE染色發(fā)現(xiàn)均存在后延伸部。陰性對照切片呈陰性表達，OD值為0。 (1)組間比較：在雙徑路和非雙徑路兩組標本房間隔(87.4±5.08、86.43±9.50)、室間隔(90±5.69、89.64±9.34)、希氏束(72±6.23、70.71±9.16)，Cx43均有強陽性表達，組間無明顯差異(P>0.

7、05)；在后延伸部，兩組表達均較弱(32±7.18、29.50±6.82)，無明顯差異(P>0.05)；在房室結(jié)雙徑路組和非雙徑路組存在明顯差異(P<0.001)：在雙徑路組表達較強(67±8.05)；在非雙徑路組房室結(jié)表達較弱(33.14±8.45)。 (2)組內(nèi)比較：雙徑路組和非雙徑路組內(nèi)房間隔和室間隔無明顯差異(P>0.05)，表達均強于希氏束(P<0.01、P<0.001)，雙徑路組希氏束表達與房室結(jié)無明顯差異(P>0.

8、05)，且二者均強于后延伸部(P<0.00 1)，而非雙徑路組希氏束表達強于房室結(jié)和后延伸部(P<0.00 1)，后兩者無明顯差異(P>0.05)。 結(jié)論：房室結(jié)向冠狀竇口沿三尖瓣環(huán)走行的后延伸是房室結(jié)淺層細胞束的自然延續(xù)，它可能參與慢徑路的形成，雙徑路組的致密結(jié)即房室結(jié)的后深部可能參與快徑路的形成。所有標本均有兩條主要的下傳路徑：心房肌一房室結(jié)后深部(致密結(jié))一希氏束一心室?。恍姆考∫缓笱由觳恳环渴医Y(jié)上淺層一希氏束一心室肌。由

9、于后延伸部傳導(dǎo)路徑較長，正常竇性心律下傳均沿前一條路徑。至于雙徑路組AV間期短于非雙徑路組，可能與前者房室結(jié)Cx43表達強于后者有關(guān)。Cx43在致密結(jié)部和后延伸部表達的差異導(dǎo)致傳導(dǎo)速度的不同，加之不應(yīng)期的不同可能是二者之間形成折返的機制之一，正因為如此，才使程控刺激時出現(xiàn)“跳躍”、折返波或誘發(fā)出AVNRT。而非雙徑路組的致密結(jié)與后延伸部Cx43表達無明顯差異，所以不能形成折返。后延伸部正是臨床上射頻治療AVNRT的消融靶點，通過探討AV