漢坦病毒感染體外培養(yǎng)的乳鼠大腦皮層神經(jīng)元誘導凋亡發(fā)生的初步研究.pdf

1、漢坦病毒（HTV）屬于布尼亞病毒科漢坦病毒屬,是引起腎綜合征出血熱(HFRS)和漢坦病毒肺綜合征(HPS)的致病病毒。HTV是一種泛嗜性病毒，病毒抗原在體內(nèi)多種器官和多種類型細胞中分布。腦組織也是HFRS病毒感染的重要靶器官之一。我們以往的研究證實HTV感染乳鼠腦神經(jīng)細胞中NP抗原免疫組化染色陽性，定位于胞漿內(nèi)，分布于皮層、海馬回、小腦蒲肯野細胞層等部位。
　　本實驗在建立乳小鼠、乳大鼠大腦皮層神經(jīng)元體外培養(yǎng)體系的基礎上，在體外對

2、HTV在腦皮層神經(jīng)元中的感染以及病毒感染對神經(jīng)元的致病性進行初步研究。實驗中采用出生后24hr之內(nèi)的乳大鼠、乳小鼠，做神經(jīng)元的原代培養(yǎng)，分別感染HTNV76-118株和SEOVL99株病毒，分別于感染后1、2、3、4、5、6、7d收集細胞，進行免疫細胞化學染色、RT-PCR、Real-timePCR、Westernblot檢測，觀察到HTV對神經(jīng)元易感，在神經(jīng)元內(nèi)成功復制、增殖。同時為了證實我們觀察到的感染后神經(jīng)元出現(xiàn)的CPE是否為凋亡

3、我們又進行了一系列凋亡檢測，Hoechst染色、TUNEL和細胞凋亡ELISA檢測證實病毒感染確實誘導了凋亡發(fā)生，而后的凋亡相關基因檢測和Mitotracker○RRedCMXRos染色顯示，隨著病毒感染時間的延長抗凋亡蛋白Bcl-2逐漸減少，而促凋亡基因Bax、p53、CytC、caspase逐漸增加，達到高峰才下降，提示HTV感染可能誘導了p53介導的線粒體凋亡途徑。本實驗在乳大、小鼠大腦皮層神經(jīng)元體外培養(yǎng)的體系基礎上，證實了神經(jīng)元