Hedgehog信號(hào)通路對(duì)慢性氟中毒大鼠肝損害的影響.pdf

1、目的: 通過(guò)研究慢性氟中毒大鼠肝臟組織中Hh信號(hào)通路的蛋白及mRNA表達(dá)水平變化以及其特異性抑制劑環(huán)粑明（Cyclopamine）的抑制作用，進(jìn)一步探討慢性氟中毒的發(fā)病機(jī)制。
　　方法: SD大鼠48只，按體重隨機(jī)分4組，每組12只，對(duì)照組(飲水含氟量＜1mg／L)；氟中毒組：自由飲用含（NaF）的自來(lái)水（含氟量50mg/L）；阻斷劑組：自由飲用含（NaF）的自來(lái)水（含氟量50mg/L），6個(gè)月后腹腔注射Cyclopamine10

2、mg/kg，隔天一次，注射3天；阻斷劑對(duì)照組：自由飲用含氟化鈉的自來(lái)水（含氟量50mg/L），6個(gè)月后腹腔注射二甲基亞砜（Dimethy Sulfoxide，DMSO），方法同阻斷劑組。通過(guò)觀察大鼠氟斑牙的發(fā)生情況以及氟離子電極法檢測(cè)尿氟、骨氟含量；應(yīng)用自動(dòng)血生化分析儀檢測(cè)大鼠肝功能；蘇木素-伊紅(Hematoxylin and Eosin，HE)染色后光鏡下觀察肝組織病理形態(tài)學(xué)改變；免疫組織化學(xué)（Immunohistochemistr

3、y，IHC）、Western blot和實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-time fluorescent quantitative PCR，RT-PCR）分別檢測(cè)肝組織中Hh信號(hào)通路Ihh，Shh，Smo，Gli1，Gli3的蛋白及其mRNA表達(dá)的改變以及Bax和Bcl-2蛋白和mRNA的表達(dá)。采用黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)總超氧化物歧化酶(T-SOD)活力，化學(xué)比色法檢測(cè)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）和谷氨酰胺合成酶（GS）活力，硫代巴比妥

4、酸法檢測(cè)脂質(zhì)過(guò)氧化物（LPO）含量。通過(guò)原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法（Transferase-mediated dUTP-bintin，TUNEL）定位并計(jì)數(shù)肝組織中凋亡細(xì)胞個(gè)數(shù)；流式細(xì)胞儀檢測(cè)肝組織中細(xì)胞凋亡率。
　　結(jié)果: 1、慢性氟中毒大鼠模型復(fù)制成功，表現(xiàn)為實(shí)驗(yàn)組大鼠出現(xiàn)氟斑牙損害，與對(duì)照組比較，氟中毒組、阻斷劑對(duì)照組尿氟、骨氟含量均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與氟中毒組、阻斷劑對(duì)照組比較，阻斷組尿氟、骨氟含量差異不顯

5、著。2、肝功能檢查及形態(tài)學(xué)觀察：與對(duì)照組比較，氟中毒組、阻斷劑對(duì)照組的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性明顯增加，血清總蛋白、白蛋白活性下降；與氟中毒組、阻斷劑對(duì)照組比較，阻斷組血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性稍有下降，血清谷草轉(zhuǎn)氨酶、總蛋白、白蛋白活性升高。表明實(shí)驗(yàn)組大鼠肝臟功能有損傷。病理形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組大鼠肝臟損傷不明顯。3、免疫組化、Western blot和Real-Time PCR結(jié)果提示：與對(duì)照組相比，氟中毒組、阻斷劑對(duì)照組Ihh，S

6、hh，Smo，Gli1，Gli3蛋白和 mRNA的表達(dá)升高，阻斷組與氟中毒組、阻斷劑對(duì)照組比較，其表達(dá)均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。4、肝組織T-SOD、GSH-Px、GS活性及LPO含量結(jié)果示：與對(duì)照組相比，氟中毒組、阻斷劑對(duì)照組中T-SOD、GSH-Px以及GS活性降低，LPO含量升高；阻斷組肝組織中T-SOD、GSH-Px以及GS活性降低的更明顯，LPO含量明顯升高。5、肝組織細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因表達(dá)結(jié)果示：TUNEL和

7、流式檢測(cè)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比較，氟中毒組和阻斷對(duì)照組中肝細(xì)胞凋亡細(xì)胞個(gè)數(shù)增多；阻斷組凋亡細(xì)胞較氟中毒組稍增多。與對(duì)照組相比，氟中毒組和阻斷對(duì)照組Bcl-2蛋白和mRNA表達(dá)強(qiáng)度降低，Bax蛋白和mRNA表達(dá)升高，Bcl-2/Bax比值降低，阻斷組更為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論: 過(guò)量氟可以激活慢性氟中毒大鼠肝組織中的Hh信號(hào)通路，環(huán)杷明則有效地抑制 Hh信號(hào)通路的活性；Hh信號(hào)通路可能與氧化應(yīng)激、凋亡以及