Hedgehog信號通路對宮頸癌的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討Hedgehog(Hh)信號通路在宮頸癌組織與細胞系的表達情況,并初步研究Hh信號通路抑制劑cyclopamine對宮頸癌細胞系HeLa和SiHa的殺傷作用和機制,為宮頸癌的早期診斷及治療新靶點的發(fā)現(xiàn)提供理論依據(jù)。
  方法:(1)用免疫組織化學染色法檢測Shh,Ihh,Ptch,Smo,Gli-1,Gli-2,Gli-3抗體在38例鱗狀細胞癌,23例CINⅢ,10例CINⅡ,4例CINⅠ,32例正常宮頸粘膜上皮組織標本

2、中的表達及分布;(2)提取38例宮頸癌組織中的DNA,采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測人乳頭瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)16和18;(3)應(yīng)用MTT法檢測cyclopamine對體外培養(yǎng)的宮頸癌細胞系HeLa和SiHa的生長抑制作用,同時觀察細胞的形態(tài)學變化;(4)通過免疫細胞化學染色法觀察HeLa細胞中Hh信號通路相關(guān)基因蛋白及Bax和Bcl-2的表達情況。
  結(jié)果:(1)在宮頸癌和癌前病變組織(C

3、INⅡ/Ⅲ)中Hh信號通路相關(guān)基因蛋白表達均顯著高于正常宮頸粘膜組織。除Gli-1/2陽性表達位于細胞質(zhì)和細胞核外,其余Hh信號通路相關(guān)基因蛋白表達均位于細胞質(zhì)。Ihh、Ptch、Smo、Gli-1、Gli-3在正常宮頸粘膜上皮中幾乎不表達。在宮頸癌中,上述七種Hh信號通路相關(guān)基因蛋白表達與正常宮頸組織相比顯著增強(P<0.05)。Shh的表達在正常宮頸上皮向CIN轉(zhuǎn)變及CIN向?qū)m頸癌轉(zhuǎn)變過程中呈雙重(均)增強。以上結(jié)果提示Hh信號通路

4、在宮頸癌及CIN中被廣泛激活。(2)38例宮頸癌組織中HPV16陽性率是71.1%,而HPV18均呈陰性。在宮頸癌組織中HPV16和18的感染與Hh信號通路相關(guān)基因蛋白表達無顯著性關(guān)系。(3)MTT比色法測定結(jié)果顯示cyclopamine能抑制HeLa和SiHa細胞增殖,其抑制率呈劑量依賴性;倒置顯微鏡下可觀察到,兩細胞株的cyclopamine組形態(tài)和數(shù)量上均出現(xiàn)改變。(4)免疫細胞化學染色結(jié)果顯示,經(jīng) cyclopamine處理的H

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