大豆異黃酮對糖尿病大鼠心肌肌漿網(wǎng)鈣離子調(diào)控蛋白和細(xì)胞膜KATP通道的作用.pdf

1、目的：研究大豆異黃酮（soy isoflavones, SI）對糖尿病大鼠心肌細(xì)胞肌漿網(wǎng)鈣離子調(diào)控蛋白、心肌細(xì)胞膜 ATP敏感性鉀通道(KATP)的基因和/或蛋白表達(dá)的影響，探討大豆異黃酮（SI）保護(hù)糖尿病心肌損傷的作用機(jī)制。
　　方法：雄性 Sprague-Dawley大鼠60只，隨機(jī)分為正常對照組(NC)、糖尿病對照組(DC)、大豆異黃酮治療組(ST)和尼爾雌醇治療組(NT)。后3組腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotoc

2、in, STZ)55 mg/kg制備糖尿病模型，監(jiān)測血糖持續(xù)在16.7 mmol/L以上者為糖尿病大鼠。第7周起，NC、DC組予0.5％CMC-Na10 ml.kg-1.d-1， ST組予大豆異黃酮120 mg.kg-1.d-1，NT組予尼爾雌醇混懸液每周0.2 mg·kg-1灌胃兩次，連續(xù)給藥6周。第12周末記錄離體心臟室內(nèi)壓曲線并分析。取心室肌組織，應(yīng)用 RT-PCR技術(shù)檢測心肌肌漿網(wǎng)鈣離子調(diào)控蛋白諸如肌漿網(wǎng) Ca2+-ATP酶(s

3、arco/endoplasmic reticulum Ca2+-ATPase, SERCA)、受磷蛋白(phospholamban, PLB)、蘭尼堿受體2型(ryanodine receptor type2, RyR2)，1,4,5-三磷酸肌醇受體2型(1,4,5-trisphosphate inositor type2, IP3R2)及三磷酸腺苷敏感性鉀通道(KATP)的磺脲類受體2（SUR2）和內(nèi)向整流型鉀離子通道6.2（Kir6

4、.2）基因表達(dá)；應(yīng)用免疫組化Elivision法檢測SERCA2a蛋白的表達(dá)；觀察心肌組織的形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)的變化。
　　結(jié)果：1.大鼠體重DC組明顯低于正常對照組，ST、NT組顯著高于DC組（P＜0.01）；空腹血糖DC組明顯高于對照組（P＜0.01），ST、NT組血糖雖有降低，但與DC組差異無顯著性（P＞0.05）。2.心功能各項指標(biāo)：左室收縮壓(LVSP)、平均壓（Mean）、室內(nèi)壓最大上升/下降(±dp/dtmax)速率、心

5、肌纖維最大縮短速度(Vpm)， DC組明顯低于正常對照組（P＜0.01），ST、NT組均高于DC組（P＜0.01）而左室舒張末壓(LVEDP)、室內(nèi)壓上升達(dá)最大速率所需時間(t-dp/dt)和時間常數(shù)(TC)，DC組明顯高于NC組(P＜0.01)，ST、NT組均低于DC組（P＜0.01）。3.心肌組織形態(tài)學(xué)的改變：光鏡下，DC組大鼠心肌肌纖維紊亂、空泡變等；電鏡下，DC組肌纖維斷裂、溶解，線粒體腫脹變性，嵴消失，而ST、NT組心肌病變明

6、顯減輕。4. RT-PCR檢測：與NC組比，DC組大鼠心肌SERCA、RyR2、IP3R2 mRNA表達(dá)顯著降低，但PLB mRNA表達(dá)顯著增高（P＜0.01）。與DC組比，ST組、NT組大鼠心肌SERCA、RyR2、IP3R2 mRNA表達(dá)顯著增高，而PLB mRNA表達(dá)顯著降低（P＜0.01）。ST、NT組KATP的SUR2和Kir6.2表達(dá)水平與DC組及NC相比無顯著差異(P＞0.05)。5.免疫組化Elivision法檢測SER