低強(qiáng)度脈沖超聲波對(duì)SD大鼠前軟骨干細(xì)胞增殖及細(xì)胞外基質(zhì)mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究低強(qiáng)度脈沖超聲波對(duì)大鼠前軟骨干細(xì)胞增殖及細(xì)胞外基質(zhì)分泌的影響，并探討可能存在的機(jī)制。
　　 方法：分離新生大鼠乳鼠的前軟骨干細(xì)胞，利用免疫磁珠分選的方法分離純化大鼠前軟骨干細(xì)胞，利用細(xì)胞表面特異性標(biāo)記物FGFR-3進(jìn)行免疫組化鑒定。取生長(zhǎng)良好的第3代細(xì)胞，用胰酶消化，含血清培養(yǎng)基中和后重懸細(xì)胞，顯微鏡下計(jì)數(shù)，以1.6X103個(gè)/ml的密度接種于96孔板，分4個(gè)組（即空白對(duì)照組、5分鐘/天組、12分鐘/天組、20分鐘/天

2、組），每組設(shè)4個(gè)復(fù)孔。置于37℃，飽和濕度，5％C02培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，待細(xì)胞貼壁后進(jìn)行低強(qiáng)度脈沖超聲波干預(yù)(超聲波強(qiáng)度為100mW/cm2,頻率為1MHz，脈沖間隔為20％)。刺激時(shí)將耦合劑均勻涂于超聲波探頭上，將探頭置于培養(yǎng)板底部進(jìn)行刺激，刺激后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞24h。分別于刺激后第一天、第三天和第五天用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖。另以2X105個(gè)/ml的密度接種細(xì)胞于直徑35mm的細(xì)胞培養(yǎng)皿，分組同前，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。干預(yù)方法同前，刺激

3、后間隔30分鐘提取總RNA，用RT-PCR法檢測(cè)Ⅱ型膠原、Aggrecan、TGF-β1及Sox9基因的表達(dá)。
　　 結(jié)果：LIPU對(duì)SD大鼠PCSCs的增殖有促進(jìn)作用，與對(duì)照組相比在第一天時(shí)只有20分鐘/天刺激組增殖比較明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而在連續(xù)刺激三天和五天后各實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均有明顯的差異，但是各實(shí)驗(yàn)組之間的差異并不顯著。LIPU對(duì)SD大鼠PCSCs的Ⅱ型膠原、Aggrecan、TGF-β1及Sox9基因mRAN的表達(dá)