偽狂犬病毒SA215-T的構(gòu)建與神經(jīng)傳導(dǎo)研究.pdf

1、偽狂犬病毒具有侵染神經(jīng)的能力，利用這一性質(zhì)，該病毒已成功應(yīng)用于對(duì)內(nèi)臟、腺體和肌肉的神經(jīng)標(biāo)記。偽狂犬病毒減毒株神經(jīng)傳導(dǎo)是目前較熱門(mén)的研究方向。減毒株通常缺失了gE、gI和US9三個(gè)基因，其中g(shù)E和gI是偽狂犬病毒重要的毒力基因，缺失后可使宿主的致死時(shí)間更長(zhǎng)，而US9的功能主要為協(xié)助gB等必需膜蛋白的順行轉(zhuǎn)運(yùn)，缺失后的病毒在突觸間將執(zhí)行嚴(yán)格的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)。采用Lipofectamine(@)3000轉(zhuǎn)染試劑，將PP63質(zhì)粒與偽狂犬病毒Fa基因組

2、DNA共轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞，蝕斑篩選gI/gE/Us9重組缺失病毒，并命名為SA215-T。采用PCR、基因測(cè)序、western-blot、電鏡檢查和生長(zhǎng)曲線(xiàn)測(cè)定重組病毒PRV SA215-T。結(jié)果:western-blot未見(jiàn)SA215-T與gE抗體發(fā)生顯色反應(yīng)，其電鏡形態(tài)與野毒無(wú)明顯差異，重組病毒與親本毒在細(xì)胞中的生長(zhǎng)曲線(xiàn)差異不明顯且達(dá)到了較高的病毒滴度。
　　為探索三種不同偽狂犬毒株SA215-T，親本毒Fa和Bartha

3、-K61對(duì)神經(jīng)的傳導(dǎo)作用，本實(shí)驗(yàn)以小鼠肱二頭肌反射為模型，統(tǒng)計(jì)了小鼠攻毒后的存活時(shí)間并建立了檢測(cè)脊髓偽狂犬病毒分布的免疫組化方法。結(jié)果: Fa小鼠平均存活時(shí)間為73.33h，與SA215-T(114.83h)或Bartha-K61(120.67h)差異極顯著(P＜0.01);瀕死小鼠脊髓與大腦經(jīng)PCR和免疫組化檢測(cè)，偽狂犬病毒主要位于頸椎C5-C6脊髓并集中分布于脊髓灰質(zhì)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元池區(qū)(motorneuron pool)，部分C5-C6