粉紋夜蛾新細(xì)胞系的建立及其特性研究.pdf

1、昆蟲細(xì)胞作為生物農(nóng)藥和基因表達(dá)的新型生物反應(yīng)器而備受青睞。因此，不斷發(fā)掘新昆蟲細(xì)胞系，為科學(xué)研究和生產(chǎn)提供新資源，是目前研究的熱點。 本研究以粉紋夜蛾受精卵為材料，建立多株粉紋夜蛾胚胎細(xì)胞系，從中篩選了一株懸浮的群體倍增時間短的，高產(chǎn)昆蟲桿狀病毒和外源蛋白的昆蟲細(xì)胞系，命名為QB-Tn9-4s。 QB-Tn9-4s細(xì)胞在輔以10％小牛血清的TNM-FH培養(yǎng)基中原代培養(yǎng)80多天開始分裂細(xì)胞。開始細(xì)胞生長慢，并且不穩(wěn)定，10

2、天左右傳代一次，細(xì)胞穩(wěn)定后3～4天傳代一次，現(xiàn)已傳代60多代。 QB-Tn9-4s細(xì)胞形態(tài)70％為紡錘形，大小為18.22x57.70μm，30％為圓形，半徑22.19μM。該細(xì)胞原代培養(yǎng)時是貼壁生長的，開始傳代培養(yǎng)時貼壁性較弱，細(xì)胞穩(wěn)定傳代培養(yǎng)后呈懸浮生長且增殖很快，群體倍增時間為25.4小時，最大生長密度可達(dá)2.0×106cells/mL。 對苜蓿丫紋夜蛾核型多角體病毒(AcMNPV)、甘藍(lán)夜蛾核型多角體病毒(MbN

3、PV)、粘蟲核型多角體病毒(MsNPV)等病毒敏感。接種AcMNPV病毒，96小時病毒感染率達(dá)92％，多角體產(chǎn)量平均為(107.2±4.5)OBs/cell，是-株高產(chǎn)桿狀病毒的細(xì)胞系。 通過隨機增DNA-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)試驗，用引物OPU-09，OPU-10，NO.2，T.ni鑒定，細(xì)胞系QB-Tn9-4s的基因組DNA與粉紋夜蛾卵基因組DNA，Tn5Bl-4細(xì)胞基因組DNA的條帶一致，與Sf-9細(xì)胞基因組DNA條帶明顯不同，說

4、明細(xì)胞系QB-Tn9-4s是-株來源于粉紋夜蛾胚胎細(xì)胞的細(xì)胞系，并且該細(xì)胞與實驗室保存的其它細(xì)胞沒有交叉污染。 QB-Tn9-4s是一株高表達(dá)重組蛋白的昆蟲細(xì)胞系。用重組病毒AcMNPV-β-gal侵染細(xì)胞，QB-Tn9-4s細(xì)胞內(nèi)β-半乳糖苷酶的產(chǎn)量與Tn5Bl-4相當(dāng)，而遠(yuǎn)高于Sf-9，第8天達(dá)到最大表達(dá)量(2.534±0.034)×104IU/mL是Sf-9的1.98倍。隨著時間的延長，QB-Tng-4s培養(yǎng)基中酶量逐漸增