人卵巢癌細(xì)胞系OVCAR3的腫瘤干細(xì)胞的分離培養(yǎng)和鑒定.pdf

1、目的: 腫瘤干細(xì)胞是存在于腫瘤中的一小部分細(xì)胞，具有無限增殖和自我更新的能力，有研究表明，很多腫瘤組織中存在具有干細(xì)胞特性的少量的細(xì)胞群，是腫瘤發(fā)生、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的原因。但對(duì)于卵巢癌的腫瘤干細(xì)胞的研究報(bào)道甚少。本研究通過無血清懸浮培養(yǎng)人卵巢癌細(xì)胞系OVCAR3，獲得具有非錨著依賴能力的腫瘤干細(xì)胞球，觀察其生物學(xué)特性及形態(tài)學(xué)的變化，并采用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)及細(xì)胞免疫化學(xué)的方法鑒定腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志ABCG2在貼壁

2、細(xì)胞及腫瘤干細(xì)胞球中的表達(dá)差異。 方法： 用無血清懸浮培養(yǎng)的方法分離培養(yǎng)腫瘤干細(xì)胞，并且在缺乏B27(無血清添加劑)、未使用超低吸附的培養(yǎng)皿及用甲基纖維素懸浮培養(yǎng)等不同的培養(yǎng)條件下觀察細(xì)胞的形態(tài)及生長情況。通過卵巢癌細(xì)胞系OVCAR3的單細(xì)胞培養(yǎng)、腫瘤干細(xì)胞球形成分析及連續(xù)傳代的方法鑒定腫瘤干細(xì)胞的特性，用RT-PCR及細(xì)胞免疫化學(xué)的方法鑒定腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志ABCG2的mRNA和蛋白表達(dá)情況。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS13.

3、0軟件進(jìn)行分析，細(xì)胞免疫化學(xué)的結(jié)果應(yīng)用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，所得數(shù)據(jù)以-x±s表示，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 在卵巢癌細(xì)胞系OVCAR3中只有少數(shù)細(xì)胞(0.9％)能在無血清懸浮培養(yǎng)的條件下存活，形成具有非錨著依賴生長的腫瘤干細(xì)胞球，并保持連續(xù)增殖分裂的能力。通過不同的培養(yǎng)方法證實(shí)，B27和超低吸附的培養(yǎng)皿對(duì)于得到腫瘤干細(xì)胞球是非常重要的條件，而在甲基纖維素中培養(yǎng)獲得的細(xì)胞團(tuán)能懸浮生長，但小而不規(guī)則。

4、單細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)腫瘤干細(xì)胞球是由單細(xì)胞增殖而來，而不是細(xì)胞聚集；腫瘤干細(xì)胞球中只有少數(shù)細(xì)胞具有再形成細(xì)胞球的能力，其比例隨傳代次數(shù)增多而增多；細(xì)胞球來源的細(xì)胞具有自我更新的能力，并能連續(xù)增殖。腫瘤干細(xì)胞球的干細(xì)胞標(biāo)志ABCG2mRNA及蛋白的表達(dá)高于在有血清的培養(yǎng)條件下貼壁生長的細(xì)胞。 結(jié)論： 在卵巢癌細(xì)胞系OVCAR3中存在一小群具有自我更新和連續(xù)增殖能力的細(xì)胞，其能在無血清的條件下形成細(xì)胞球、懸浮生長并連續(xù)傳代，高