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文檔簡介
1、背景:
肺癌發(fā)病率高,惡性程度高,預(yù)后差,死亡率高,占腫瘤相關(guān)死亡的首位。CSCs是一群異質(zhì)性細胞,能自我更新并有無限增殖和多向分化潛能。肺癌干細胞與肺癌的發(fā)生發(fā)展,維持,侵襲轉(zhuǎn)移,復(fù)發(fā),耐藥等密切相關(guān)。因此,對肺癌干細胞的研究可為肺癌提供更多的治療方向。然而肺癌中肺癌干細胞含量極少,有效分離得到肺癌干細胞是進行肺癌干細胞研究的重要基礎(chǔ)。我們將采用兩種不同的方式來分離人肺癌細胞系NCI-H1650中的干細胞。
目的:
2、
分離出入肺癌細胞系NCI-H1650中的干細胞并進行鑒定。
方法:
1.應(yīng)用無血清培養(yǎng)聯(lián)合紫杉醇刺激的方法誘導(dǎo)NCI-H1650干細胞。
2.流式細胞術(shù)和免疫熒光檢測誘導(dǎo)細胞表面CD133和CD326表達;采用RT-PCR和Western blot檢測干性基因Oct-4、Nanog、Sox-2。
3.應(yīng)用免疫磁珠分選法分選NCI-H1650干細胞。
4.免疫熒光檢測磁珠分選細
3、胞表面CD133和CD326表達;采用RT-PCR和Western blot檢測干性基因Oct-4、Nanog、Sox-2。
結(jié)果:
1.誘導(dǎo)NCI-H1650干細胞在SFM中呈球形生長。
2.誘導(dǎo)NCI-H1650干細胞表達干細胞表面標志CD133和CD326。
3.誘導(dǎo)NCI-H1650干細胞表達干性基因Oct-4、Nanog、Sox-2。
4.磁珠分選細胞在SFM中呈球形生長。
4、r> 5.磁珠分選細胞表達干細胞表面標志CJ133和CD326。
6.磁珠分選細胞表達干性基因Oct-4、Nanog、Sox-2。
結(jié)論:
1.無血清培養(yǎng)聯(lián)合紫杉醇刺激能有效誘導(dǎo)NCI-H1650干細胞,并高表達CSCs表面標志CD133和CD326,高表達CSCs相關(guān)基因Oct-4、Nanog和Sox-2。
2.免疫磁珠分選法能有效分選出NCI-H1650干細胞,并高表達CSCs表面標志CD1
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