玫瑰黃鏈霉菌誘導(dǎo)黃瓜抗線相關(guān)WRKY基因的表達(dá)分析及其藥效試驗.pdf

1、根結(jié)線蟲病是影響設(shè)施蔬菜產(chǎn)量和質(zhì)量的主要病蟲害之一，每年都給我國設(shè)施蔬菜的生產(chǎn)造成很嚴(yán)重的損失。雖然化學(xué)藥劑的施用起到了一定的作用，但其長期和不當(dāng)使用給人類和壞境帶來了很大的安全隱患。生物防治因其綠色環(huán)保等優(yōu)點越來越受到人們的關(guān)注。玫瑰黃鏈霉菌（Strempomyces roseoflavus）Men-myco-93-63是本實驗室保存的一株拮抗鏈霉菌，該菌株及其水劑對多種重要的植物病原菌都具有較強的抑制作用，前期研究表明Men-myc

2、o-93-63對根結(jié)線蟲也具有較好的防治作用，但其生防作用機制目前還不是很明確。本文以津優(yōu)1號黃瓜苗為試驗材料，利用RT-PCR擴增技術(shù)，對Men-myco-93-63處理前后，黃瓜幼苗不同時間不同組織中WRKY轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)情況進(jìn)行了檢測和分析，并檢測了Men-myco-93-63片劑對黃瓜根結(jié)線蟲病的防效以及其對土壤微生物區(qū)系的影響。具體結(jié)果如下:
　　1、米集河北省定州市西南合蔬菜棚中的黃瓜病株，分離根結(jié)線蟲，提取DNA，利

3、用ITS通用引物進(jìn)行PCR擴增及測序，使用BLAST軟件進(jìn)行序列比對，將其鑒定為南方根結(jié)線蟲（Meloidogyne incognita）。
　　2、通過RT-PCR擴增，篩選到6個與Men-myco-93-63抗線蟲相關(guān)的WRKY轉(zhuǎn)錄因子，對這些轉(zhuǎn)錄因子在Men-myco-93-63水劑處理后，在黃瓜幼苗不同組織不同時間點的表達(dá)情況進(jìn)行了檢測，結(jié)果表明，在黃瓜幼苗不同組織中，6個WRKY基因的表達(dá)量會隨處理時間的延長而發(fā)生變化。

4、其中，WRKY24僅在黃瓜根組織中表達(dá)，其表達(dá)量較根結(jié)線蟲處理稍高;WRKY17、WRKY23、WRKY48、WRKY49、WRKY55在根組織中的表達(dá)量與根結(jié)線蟲處理比呈上調(diào)趨勢，且WRKY17和WRKY48在24h達(dá)到表達(dá)高峰，WRKY23和WRKY49表達(dá)量變化不規(guī)律。在莖組織中，WRKY17、WRKY49、WRKY55基因的表達(dá)量較根結(jié)線蟲處理高，其中，WRKY55的正調(diào)控作用在處理前期最為顯著;WRKY23、WRKY48的表達(dá)

5、量呈下調(diào)趨勢。葉組織中，WRKY17、WRKY48、WRKY49、WRKY55的表達(dá)量相對于根結(jié)線蟲處理上調(diào)，其中，WRKY23和WRKY49的上調(diào)作用較小;WRKY23基因受Men-myco-93-63水劑調(diào)控作用微小，表達(dá)量與根結(jié)線蟲處理相近。Men-myco-93-63水劑對多數(shù)WRKY轉(zhuǎn)錄因子在根組織中的調(diào)控作用大于莖和葉組織。推測Men-myco-93-63水劑對黃瓜幼苗根、莖、葉組織中WRKY轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控作用在黃瓜防御根結(jié)

6、線蟲的過程中發(fā)揮了一定的積極作用，但生防菌對不同組織中不同WRKY轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控作用存在差異。
　　3、利用溫室盆栽法和平板稀釋法，測定Men-myco-93-63片劑對黃瓜根結(jié)線蟲病的防效及其對土壤中微生物區(qū)系的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Men-myco-93-63片劑對黃瓜根結(jié)線蟲病具有良好的防效，1.0g/株和1.5g/株用量時防效分別為51.85％和55.56％，而淡紫擬青霉顆粒劑1.5g/株和Men-myco-93-63固體發(fā)酵物