癌胚抗原相關結直腸癌的臨床及蛋白質組學初步研究.pdf

1、CRC是世界上最常見的三大惡性腫瘤之一，我國CRC的死亡率在常見腫瘤中排在第四位，發(fā)病率在逐漸上升。目前臨床上早期診斷率不高，就診的患者大多數已經屬于進展期。CEA是臨床上應用最廣泛的血清腫瘤學標志物，但其敏感性和特異性不高。與CEA+CRC相比，CEA-CRC更缺乏血清學診斷和監(jiān)測指標。因此，很迫切需要尋找一些更有效的CRC分子標志物。穩(wěn)定同位素標記聯(lián)合液相串聯(lián)質譜技術(iTRAQ-LC-MS/MS)的建立和發(fā)展，為尋找有效腫瘤分子標

2、志物提供了可靠的技術手段。本研究以CRC為研究對象，分以下幾個部分進行，試圖篩選出有價值的CRC候選標志物。
　　第一部分血清CEA陰性和陽性結直腸癌的臨床和流行病特征比較——附1969例分析
　　本部分的研究目的是通過回顧性調查與CEA相關1969例CRC患者的臨床和流行病學特征，了解CEA相關的這兩類CRC有何不同以及CEA的血清陽性率情況，為后續(xù)基礎研究做鋪墊。
　　結果顯示，CEA的血清陽性率為38.04％，C

3、EA陰性結直腸癌平均發(fā)病年齡比CEA陽性結直腸癌年輕2歲多，中位發(fā)病年齡較后者提前3歲，發(fā)病人群以60歲以下的青壯年為主，其中A型血患者比例較高，而B型血患者比例較低，并發(fā)2型糖尿病和結腸腸梗阻比例較低。
　　本研究說明，CEA血清陽性率不高，缺乏敏感性，CEA陰性結直腸癌和CEA陽性結直腸癌在臨床和流行病學上確實有一定的差異，為后續(xù)深入研究奠定了基礎。
　　第二部分 CEA陰性和陽性結直腸癌的組織蛋白質組學比較與驗證

4、>　　本部分的研究目的是比較血清CEACRC和CEA+CRC與正常粘膜組織(normal mucosa，NM)之間差異表達蛋白，驗證部分有差異表達的蛋白質，試圖尋找潛在的候選標志物。
　　結果顯示，在篩出的57個差異蛋白質中，大多數細胞功能定位在胞內，生物學過程主要體現(xiàn)為調控和代謝，分子功能主要參與結合。許多差異蛋白之間有聯(lián)系，尤其是差異蛋白TTN、PRDX1、TAGLN、TP11等，處于蛋白相互作用網絡的中心樞紐節(jié)點上。采用We

5、stern Blot(WB)和免疫組織化學染色驗證差異蛋白Annexin A5和Trangelin表達，它們趨勢與質譜鑒定信息一致。采用熒光定量PCR驗證Lumican蛋白對應基因mRNA表達水平，結果與質譜信息不一致。
　　本研究說明，iTRAQ定量標記是尋找CRC有效分子標志物的重要方法，但需要驗證確認。本實驗篩選出一組與CEA相關組織差異蛋白，其中有些可能是CRC潛在的分子標志物。
　　第三部分 CEA陰性和陽性結直腸

6、癌的分泌蛋白質組學比較與驗證
　　本部分的研究目的是比較血清CEACRC、CEA+CRC與NM微小組織塊培養(yǎng)上清之間差異分泌表達蛋白，驗證部分有差異表達的蛋白質，試圖尋找可能在血清中出現(xiàn)的的潛在候選標志物。
　　結果顯示，在篩出的61個差異蛋白質中，總共有50.82％(31/61)是分泌蛋白，其中有一些是未見報道與腫瘤相關的分泌差異蛋白，Western Blot驗證差異蛋白Annexin A5和Trangelin，結果顯示它

7、們表達趨勢與質譜鑒定信息基本相似，但分泌表達模式與組織表達模式存在分離現(xiàn)象。
　　本研究說明，分泌蛋白組學是組織蛋白組學的有益補充;本實驗篩選出一組與CEA相關的分泌差異蛋白，可能是CRC潛在的血清分子標志物。
　　第四部分 AnnexinA5和Lumican在結直腸癌的表達和意義
　　本部分的研究目的是擴大樣本研究Annexin A5和Lumican在結直腸癌的表達和意義，為下一步進行功能研究進行初步篩選。
　

8、　結果顯示，Annexin A5在CRC陽性率為40％(20/50)，明顯高于正常組織，其表達與CRC分期、轉移有關。Lumican在結直腸癌呈高表達，與病理參數無關。
　　本研究說明，Annexin A5和Lumican是結直腸癌的重要候選分子標志物，具體的作用機制還有待深入研究。
　　結論
　　1.CEA血清陽性率不高，缺乏敏感性，CEA陰性結直腸癌和CEA陽性結直腸癌在臨床和流行病學上確實有一定的差異。
　

9、　2.iTRAQ定量標記是尋找CRC有效分子標志物的重要方法，但需要驗證確認。組織蛋白組學篩選出57個與CEA相關差異蛋白，分泌蛋白組學選出61個與CEA相關差異蛋白，兩組差異蛋白有較多重復，但差異蛋白的組織表達模式與分泌表達模式可以不一致。本組篩選出的差異蛋白，有些可能CRC潛在分子標志物。
　　3.改良Alamar blue法是檢測組織塊活力靈敏有效的新型檢測方法之一。
　　4.AnnexinA5和Lumican表達與結