微小RNA miRNA-9在小鼠肝癌細胞淋巴道轉(zhuǎn)移中的作用.pdf

1、肝癌是世界范圍內(nèi)常見的惡性腫瘤之一，據(jù)世界衛(wèi)生組織2014年統(tǒng)計，在我國男性或女性中，肝癌的發(fā)病率均位居前五位。轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致肝癌癥復(fù)發(fā)及致死的重要原因之一，研究肝癌轉(zhuǎn)移的分子機制刻不容緩。
　　糖基化修飾作為蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄翻譯后一種重要的修飾方式，在蛋白質(zhì)合成、正確折疊、細胞識別等過程中發(fā)揮重要的生物學(xué)功能。糖基化修飾主要由糖基轉(zhuǎn)移酶糖基催化完成。糖基化修飾異常，即糖基轉(zhuǎn)移酶表達異常及糖鏈結(jié)構(gòu)異常是惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移的共同特征。唾液

2、酸是一類九碳酸性糖的總稱，一般連接于糖蛋白和糖脂糖鏈的末端，介導(dǎo)或調(diào)控炎癥、病原感染、腫瘤發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移等諸多病理過程。α-2,6唾液酸轉(zhuǎn)移酶(ST6Gal1)是脊椎動物唾液酸轉(zhuǎn)移酶家族成員，催化活化的唾液酸以α-2，6連接糖苷鍵與半乳糖共價結(jié)合。本實驗室的前期研究發(fā)現(xiàn):上調(diào)ST6Gal1及其催化產(chǎn)物α-2，6連接唾液酸的表達，促進小鼠肝癌細胞經(jīng)淋巴道的轉(zhuǎn)移潛能。
　　miRNA是真核生物中一類內(nèi)源性具有調(diào)控功能的非編碼RNA，通

3、過與靶基因3'UTR區(qū)域特異結(jié)合進而抑制靶基因的表達和相關(guān)功能，參與細胞發(fā)育、增殖、凋亡等過程。文獻報道及本實驗的研究結(jié)果表明:靶向糖基轉(zhuǎn)移酶的miRNA調(diào)控糖基轉(zhuǎn)移酶的表達并改變細胞表面糖蛋白糖基化的修飾。但是，miRNA對ST6Gal1表達及其催化產(chǎn)物α-2，6連接唾液酸生成的調(diào)控作用，尚未見報道。
　　本研究以無、低、高淋巴道轉(zhuǎn)移潛能的小鼠肝癌細胞Hepa1-6、Hca-P、Hca-F為對象，基于本實驗室前期完成的上述三種細

4、胞高通量芯片分析miRNA表達譜，篩選與轉(zhuǎn)移潛能相關(guān)表達顯著差異的miRNA，并應(yīng)用qPCR、免疫印跡分析和流式細胞分析術(shù)等方法驗證，發(fā)現(xiàn): miRNA-9的表達量與小鼠肝癌細胞淋巴道轉(zhuǎn)移潛能、ST6Gal1及其催化產(chǎn)物α-2，6連接唾液酸的表達呈負相關(guān)。雙熒光素酶報告基因分析結(jié)果表明，miRNA-9與ST6Gal1的3'UTR區(qū)域特異性結(jié)合。通過轉(zhuǎn)染上調(diào)細胞miRNA-9的表達量，能夠抑制ST6Gal1及α-2，6連接唾液酸的表達水平

5、，同時降低細胞增殖、遷移、侵襲、黏附能力，抑制與黏附能力密切相關(guān)的FAK信號通路;反之，ST6Gal1及α-2，6連接唾液酸的表達水平提高，細胞增殖、遷移、侵襲、黏附能力升高，F(xiàn)AK信號通路得到激活。
　　以上結(jié)果提示:ST6Gal1是miRNA-9調(diào)控的靶基因之一。miRNA-9通過抑制小鼠肝癌細胞中ST6Gal1和α-2，6連接唾液酸的表達，衰減FAK信號通路的激化，進而抑制其淋巴道轉(zhuǎn)移能力。miRNA-9可能是腫瘤轉(zhuǎn)移干預(yù)藥