CD147糖基化在小鼠肝癌細(xì)胞淋巴道轉(zhuǎn)移中的作用.pdf

1、本文的主要工作如下：1.CD147和Cav-1在小鼠肝癌細(xì)胞中的表達(dá)通過流式細(xì)胞術(shù)、RT-PCR、免疫印跡分析(Westernblotanalysis)Hca-F、Hca-P、Hepa1-6和IAR-20細(xì)胞中Cav-1、CD147及其糖型的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，HG-CD147(分子量40～57kDa)在高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株Hca-F中表達(dá)較多，在低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株Hca-P中表達(dá)較少。而無轉(zhuǎn)移潛能的小鼠肝癌細(xì)胞株Hepa1-6中，LG-CD147(

2、分子量～33kDa)占主要部分，小鼠正常肝細(xì)胞株IAR-20中檢測不到CD147的表達(dá)。Cav-1在Hca-F、Hca-P和IAR-20細(xì)胞中均有表達(dá)，且IAR-20細(xì)胞的表達(dá)強(qiáng)度明顯低于Hca-F和Hca-P細(xì)胞，而Hepa1-6細(xì)胞無Cav-1表達(dá)。以上結(jié)果表明，CD147主要表達(dá)于具有淋巴道轉(zhuǎn)移潛能的細(xì)胞表面；Cav-1高表達(dá)可能與腫瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān)，而Cav-1表達(dá)的缺如可能與原位癌有關(guān)。 2.CD147去糖基化在小鼠肝癌細(xì)

3、胞淋巴道轉(zhuǎn)移中的作用通過WestenBlot、體外黏附實(shí)驗(yàn)分析去糖基化在小鼠肝癌細(xì)胞淋巴道轉(zhuǎn)移中的作用。結(jié)果顯示，用M糖基化抑制劑衣霉素處理Hca-F細(xì)胞后，HG-CD147表達(dá)量明顯減少，LG-CD147表達(dá)完全消失，但是出現(xiàn)一條27kDa的蛋白質(zhì)條帶，為脫糖蛋白質(zhì)條帶，是衣霉素抑制細(xì)胞表面糖蛋白糖基化的結(jié)果；Hca-G細(xì)胞與淋巴結(jié)切片間的黏附能力與對照組相比逐漸下降，且其抑制率在一定時(shí)間內(nèi)呈現(xiàn)一定范圍的衣霉素濃度依賴性；與對照組相比

4、，MMP-11蛋白質(zhì)表達(dá)隨著HG-CD147表達(dá)下調(diào)逐漸降低，而且其抑制程度在一定時(shí)間內(nèi)呈現(xiàn)一定范圍的衣霉素濃度依賴性。以上結(jié)果表明CD147去糖基化不但影響MMP-11蛋白的表達(dá)，而且抑制Hca-F細(xì)胞的體外黏附能力，從而影響小鼠肝癌細(xì)胞淋巴道的轉(zhuǎn)移。 3.Cav-1調(diào)節(jié)CD147糖基化在小鼠肝癌細(xì)胞淋巴道轉(zhuǎn)移中的作用3.1Cav-1表達(dá)下調(diào)對CD147糖基化的影響通過RNA干擾技術(shù)特異性使小鼠肝癌細(xì)胞株Hca-F中Cav-1

5、表達(dá)下調(diào)時(shí)對CD147糖基化的影響。WestenBlot結(jié)果顯示，Hca-F/RNAi細(xì)胞中Cav-1的蛋白表達(dá)與未給予RNA干擾處理的對照組及RNA干擾對照組相比出現(xiàn)明顯下調(diào)；同時(shí)HG-CD147表達(dá)減少，LG-CD147表達(dá)增加；且MMP-11蛋白表達(dá)隨著HG-CD147表達(dá)下降而下調(diào)。體外遷移、侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與未給予RNA干擾處理的對照組及RNA干擾對照組相比，Hca-F/RNAi細(xì)胞遷移及穿過基質(zhì)膠的侵襲能力下降。以上結(jié)果表

6、明，下調(diào)Hca-F細(xì)胞中Cav-1表達(dá)，不但影響HG-CD147表達(dá)水平，而且下調(diào)MMP-11蛋白質(zhì)表達(dá)；同時(shí)下調(diào)的Cav-1抑制Hca-F/RNAi細(xì)胞體外遷移、侵襲能力。 3.2Cav-1穩(wěn)定表達(dá)對CD147糖基化的影響通過轉(zhuǎn)染技術(shù)使Cav-1在小鼠肝癌細(xì)胞株Hepa1-6中穩(wěn)定表達(dá)時(shí)對CD147糖基化的影響。WestenBlot結(jié)果顯示，穩(wěn)定表達(dá)的Cav-1對HG-CD147和LG-CD147蛋白表達(dá)有直接的影響。與未轉(zhuǎn)染

7、細(xì)胞Hepa1-6及空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞Hepa1-6/Mock對照組相比，HG-CD147蛋白表達(dá)量明顯上調(diào)，而LG-CD147蛋白表達(dá)量顯著降低；同時(shí)MMP-11蛋白表達(dá)隨著HG-CD147表達(dá)增加而上調(diào)。體外遷移、侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與未轉(zhuǎn)染細(xì)胞Hepa1-6及空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞Hepa1-6/Mock對照組相比，Hepa1-6/Cav-1細(xì)胞遷移及穿過基質(zhì)膠的侵襲能力下降。以上結(jié)果表明，Hepa1-6細(xì)胞中Cav-1的穩(wěn)定表達(dá)不僅可以促

8、進(jìn)LG-CD147向HG-CD147的轉(zhuǎn)化，還能誘導(dǎo)MMP-11蛋白表達(dá)；同時(shí)穩(wěn)定表達(dá)的Cav-1增強(qiáng)Hepa1-6/Cav-1細(xì)胞體外遷移、侵襲能力。 綜上所述，我們的研究表明，細(xì)胞表面的免疫球蛋白超家族CD147顯示獨(dú)特的分子特性；Cav-1在腫瘤中的生物學(xué)作用具有雙重性，既是抑癌基因而又能促進(jìn)癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移；CD147糖基化與Cav-1具有較高的相關(guān)性，并進(jìn)一步闡明CD147的糖基化及其調(diào)節(jié)在腫瘤轉(zhuǎn)移中的重要作用，為抗腫