犬Ⅲ型干擾素的功能特點(diǎn)及B型流感病毒NEP蛋白出核功能研究.pdf

1、在本研究中，首次對(duì)犬Ⅲ型干擾素的功能進(jìn)行了詳細(xì)的研究。基于核酸序列的系統(tǒng)進(jìn)化分析表明，該犬Ⅲ型干擾素與豬IFN-λ1，蝙蝠IFN-λ1和人IFN-λ1自然的聚為一支，表明該犬Ⅲ型干擾素為IFN-λ1。將該IFN-λ1于大腸桿菌中進(jìn)行了表達(dá)，純化，并對(duì)純化后的蛋白進(jìn)行了功能研究。結(jié)果表明，該IFN-λ1在同種和異種細(xì)胞上均具有一定的抗病毒活性，包括VSV病毒、犬細(xì)小病毒和H1N1流感病毒等。研究還發(fā)現(xiàn)犬IFN-λ1在CMT腫瘤細(xì)胞和MDC

2、K細(xì)胞上均具有抗增殖活性，且在CMT腫瘤細(xì)胞上的抗增殖活性更強(qiáng)。此外，犬IFN-λ1可以激活JAK-STAT信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)。為了驗(yàn)證該犬IFN-λ1是否能誘導(dǎo)干擾素誘導(dǎo)基因的表達(dá)，我們還用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測了犬IFN-λ1刺激MDCK細(xì)胞后的ISG15，Mx1和2'5'-OAS表達(dá)水平，結(jié)果表明，該三種干擾素誘導(dǎo)基因均被顯著上調(diào)。我們還用同樣的方法檢測了VSV和流感病毒感染后的MDCK細(xì)胞中的IFN-λ1的mRNA水平，結(jié)果顯示

3、，與對(duì)照相比，IFN-λ1的mRNA水平也明顯被上調(diào)。最后，本研究還通過ELISA的方法進(jìn)行了犬IFN-λ1與其受體胞外域（IFNλR1-EC）的結(jié)合檢測，結(jié)果顯示，犬IFN-λ1能很好的與IFNλR1-EC進(jìn)行結(jié)合。
　　流感病毒的核輸出蛋白(NEP蛋白)是病毒粒子中的結(jié)構(gòu)蛋白，由病毒的第八個(gè)基因片段編碼產(chǎn)生，在病毒的基因組復(fù)制與轉(zhuǎn)錄，病毒vRNP復(fù)合物的細(xì)胞核輸出過程、病毒粒子的組裝、出芽等多個(gè)環(huán)節(jié)發(fā)揮著重要作用。目前對(duì)B型流