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1、目的:動(dòng)態(tài)觀察戊四氮(PTZ)慢性點(diǎn)燃模型組和Rho激酶抑制劑法舒地爾(fasudil)干預(yù)組中Rho GTP酶家族成員Racl和RhoA在海馬各區(qū)的表達(dá)變化及苔蘚纖維出芽的程度,探討Rho GTP酶及其參與的信號(hào)通路在苔蘚纖維出芽過(guò)程中發(fā)揮的作用,并推斷法舒地爾對(duì)癲癇的可能作用。 方法: 1)健康雄性SD大鼠(體重約200克)210只隨機(jī)分為PTZ組(n=84)、法舒地爾干預(yù)組(n=84)和生理鹽水對(duì)照組(n=42)。
2、PTZ組大鼠每日腹腔注射閾下劑量PTZ30mg/kg,制作點(diǎn)燃癲癇模型;干預(yù)組先腹腔注射法舒地爾15mg/kg,半小時(shí)后注射PT230mg/kg;對(duì)照組腹腔注射等量無(wú)菌生理鹽水。根據(jù)Racine標(biāo)準(zhǔn)判定癲癇發(fā)作的程度。選取第一次給藥后1天、3天、1周、2周、4周、6周和8周為研究時(shí)間點(diǎn),將三組分成七個(gè)亞組,以海馬CA3區(qū)和齒狀回門(mén)區(qū)為研究部位。 2)不同時(shí)間點(diǎn)行Timm染色觀察齒狀回門(mén)區(qū)和海馬CA3區(qū)苔蘚纖維出芽情況。
3、3)免疫組化方法檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)海馬各區(qū)Racl、RhoA的表達(dá)變化。 結(jié)果: (1)癲癇行為學(xué)觀察:PTZ組和法舒地爾干預(yù)組在癇性發(fā)作級(jí)別,出現(xiàn)癇性發(fā)作時(shí)間和點(diǎn)燃率上均無(wú)明顯差異。 (2)苔蘚纖維出芽的動(dòng)態(tài)變化:在各時(shí)間點(diǎn),PTZ組和干預(yù)組之間CA3區(qū)苔蘚纖維出芽評(píng)分無(wú)明顯差異,兩組中除第1天外其余各時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組相比均有顯著差異(P<0.05)。從3天起評(píng)分漸增,達(dá)高峰時(shí)間為2周并且維持至8周。齒狀回顆粒細(xì)胞上區(qū)
4、苔蘚纖維出芽評(píng)分為0~1分,且各時(shí)間點(diǎn)之間及與對(duì)照組之間比較無(wú)差異。對(duì)照組CA3區(qū)和齒狀回顆粒細(xì)胞上區(qū)苔蘚纖維出芽評(píng)分均僅0~1分,各時(shí)間點(diǎn)之間無(wú)差異。 (3)在對(duì)照組大鼠海馬齒狀回、門(mén)區(qū)、CA1和CA3區(qū)均有Racl、RhoA的表達(dá),免疫陽(yáng)性細(xì)胞主要在CA3區(qū)的錐體細(xì)胞和門(mén)區(qū)。 ①Racl的表達(dá): PTZ組和干預(yù)組中Racl蛋白表達(dá)的變化趨勢(shì)基本一致(p<0.05)。與對(duì)照組比較,兩組中Racl在3天時(shí)表達(dá)開(kāi)始
5、增加,2周時(shí)達(dá)高峰,4周和6周維持在較高水平,8周時(shí)表達(dá)有所下降,但仍高于對(duì)照組水平,p<0.05。 ②RhoA的表達(dá): PTZ組和干預(yù)組中RhoA蛋白表達(dá)的變化趨勢(shì)基本一致(p<0.05),與對(duì)照組比較,兩組中RhoA在1周時(shí)表達(dá)開(kāi)始增加,4周時(shí)達(dá)高峰,6周時(shí)維持在較高水平,8周時(shí)下降至接近1周水平,p<0.05。 結(jié)論:PTZ點(diǎn)燃大鼠海馬Racl和RhoA表達(dá)增加參與了苔蘚纖維出芽過(guò)程;法舒地爾對(duì)Racl和R
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