志賀樣毒素Ⅱ型變異體B亞基單克隆抗體的制備.pdf

1、本研究應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增了SLT-IIeB基因，經(jīng)序列測(cè)定。結(jié)果與參考序列的同源性達(dá)100％。將PCR產(chǎn)物克隆到原核表達(dá)載體pET-30a中，轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21(DE3)并用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。通過(guò)Ni離子親和層析純化融合表達(dá)的SLT-IIeB蛋白，以此作為免疫原免疫BALB/c小鼠。利用細(xì)胞融合技術(shù)將小鼠脾細(xì)胞和SP2/0細(xì)胞融合，經(jīng)間接ELISA檢測(cè)和四次亞克隆，獲得6株陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞，分別命名為2810、3A8、3C11、3D7

2、、3G7和4F3。經(jīng)單克隆抗體亞類試劑盒鑒定，6株單克隆抗體的亞類包括IgG2a、IgG2b、IgA和IgM，且均為κ輕鏈。經(jīng)雜交瘤細(xì)胞染色體數(shù)目分析，6株雜交瘤細(xì)胞的平均染色體數(shù)是90～115.明顯多于SP2/0骨髓瘤細(xì)胞數(shù)(55～65)。ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，6株雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清液的效價(jià)分別為1:128～1:512。以兩株分泌IgG類單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞(3G7.4F3)制備的腹水，效價(jià)均為1:105。阻斷ELISA結(jié)果顯示，