黃曲霉毒素B1單克隆抗體和單鏈抗體的制備.pdf

1、黃曲霉毒素B1(Aflatoxin B1，AFB1)是黃曲霉毒素中毒性最強(qiáng)的一種毒素，國(guó)際上以黃曲霉毒素的毒性作為10，000的基準(zhǔn)，來比較其它物質(zhì)的毒性。黃曲霉毒素的危害性主要表現(xiàn)為強(qiáng)烈的毒性和致癌性，由于它在花生、玉米等食品中廣泛存在，因此嚴(yán)重危害了人們的身體健康。在現(xiàn)代社會(huì)里，隨著人們生活水平的提高，人們?nèi)找骊P(guān)注食品安全問題，食品安全已引起各國(guó)政府的嚴(yán)重關(guān)注，歐盟在2000年就提出了世界上最嚴(yán)格的安全標(biāo)準(zhǔn)和檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，其中AFB1為

2、2μg/kg，總黃曲霉毒素為4 μg/kg。因此，也形成了新貿(mào)易壁壘，對(duì)我們國(guó)家的農(nóng)產(chǎn)品出口造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失。 本研究以AFB1-BSA免疫小白鼠，經(jīng)過三次免疫以后，用間接ELISA法檢測(cè)小鼠血清，選取血清效價(jià)高達(dá)16000的小鼠，在四免后取效價(jià)最高的小鼠的脾臟細(xì)胞，利用50％PEG4000將其與SP2/0細(xì)胞進(jìn)行融合，制備雜交瘤細(xì)胞。經(jīng)過對(duì)培養(yǎng)上清的篩選和雜交瘤細(xì)胞的克隆化，最終得到能分泌黃曲霉毒素B1抗體的雜交瘤細(xì)胞株0

3、G9。再將單克隆雜交瘤細(xì)胞系提取RNA，經(jīng)過RT-PCR獲得抗體可變區(qū)基因，利用一柔性肽段(Linker)連接形成單鏈抗體(single chain fragments variable，scFv)，后應(yīng)用基因工程方法，將scFv與噬菌粒載體pCANTAB-5E連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌TG1，獲得單鏈抗體噬菌體文庫(kù)和利用噬菌體展示(Phage display)技術(shù)對(duì)抗體庫(kù)進(jìn)行了4輪淘選(panning)，獲得了AFB1特異性的單鏈抗體，為進(jìn)一