液基細(xì)胞學(xué)、HPV及hTERC、C-MYC基因檢測(cè)在宮頸癌篩查和隨訪中的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　1、本文通過檢測(cè)宮頸病變患者宮頸上皮脫落細(xì)胞中人端粒酶mRNA(human telomerase mRNA component，hTERC)基因和c-myc基因的表達(dá)以及人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)的感染情況和液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)的分級(jí)，以臨床病理結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，分析比較液基細(xì)胞學(xué)、HPV檢測(cè)、hTERC和c-myc基因擴(kuò)增檢測(cè)對(duì)宮頸病變的預(yù)測(cè)價(jià)值。
　　2、將c-myc基因、hTER

2、C基因、HPV亞型及薄層液基細(xì)胞學(xué)(thinPrep cytologic test，TCT)的檢查結(jié)果進(jìn)行比較及相關(guān)性的分析，擬尋求宮頸病變篩查更準(zhǔn)確的聯(lián)合檢測(cè)方法。
　　3、對(duì)行宮頸錐切和子宮切除治療的CIN患者進(jìn)行隨訪，檢測(cè)hTERC、c-myc基因、HPV亞型及TCT，探討hTERC、c-myc基因檢測(cè)及其聯(lián)合HPV、TCT檢測(cè)在CIN手術(shù)治療后隨訪中的價(jià)值。
　　方法:
　　選擇2011年1月～2011年9月就

3、診于重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦科的1000例已婚或有性生活史，年齡25～64歲，符合入選要求的婦女。所有入選患者均刷取宮頸脫落細(xì)胞行液基細(xì)胞學(xué)檢查，其殘留液同時(shí)用作熒光原位雜交(fluorescence in situ hxbridization，F(xiàn)ISH)技術(shù)檢測(cè)c-myc基因、hTERC基因的表達(dá)，表面等離子共振(surface plasmonresonance，SPR)技術(shù)檢測(cè)HPV亞型。液基細(xì)胞學(xué)、HPV亞型、hTERC基因、c

4、-myc基因任一指標(biāo)陽性的患者均行陰道鏡及病理活組織檢查。以病理學(xué)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，分析液基細(xì)胞學(xué)、HPV檢測(cè)、hTERC基因和c-myc基因檢測(cè)單獨(dú)篩查對(duì)于子宮頸癌篩查的靈敏度和特異性，評(píng)價(jià)與臨床病理結(jié)果的相關(guān)性。
　　經(jīng)篩選有117例患者需行陰道鏡檢查及活檢，但有2例主動(dòng)放棄。所以有115例患者有病理學(xué)結(jié)果。對(duì)病檢正常/炎癥和CINⅠ者直接隨訪而不治療;CINⅡ、CINⅢ、SCC均采取手術(shù)治療為主，術(shù)后6月隨訪。隨訪中，26例失訪

5、，其中以炎癥、全子宮切除患者為主;有89例復(fù)診，并于6個(gè)月時(shí)對(duì)其再次刷取宮頸脫落細(xì)胞行TCT、HPV、c-myc、hTERC檢測(cè)，有異常時(shí)行陰道鏡下宮頸活檢及組織病理學(xué)檢查。
　　結(jié)果:
　　1、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC患者中TCT檢測(cè)結(jié)果的陽性率分別為87.5％、96.4％、100％、100％。隨著病理級(jí)別的增高，TCT檢查結(jié)果的陽性率增加。但對(duì)不同等級(jí)CIN的篩查，沒有明顯的優(yōu)越差異(P=0.061)。

6、>　　2、隨著病變組織病理學(xué)程度的增加，c-myc基因陽性擴(kuò)增患者病例數(shù)增加，c-myc基因陽性擴(kuò)增率增加，在正常組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組、SCC組中c-myc基因擴(kuò)增陽性患者比率分別為:41.67％，18.75％，39.29％，54.90％，87.50％。結(jié)果顯示:不同病理級(jí)別之間c-myc基因擴(kuò)增的陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3、病理檢測(cè)級(jí)別為正常、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC的患者中h

7、TERC的陽性率分別是:33.33％、25％、50％、68.63％、87.50％。隨著病變嚴(yán)重程度增加，hTERC基因擴(kuò)增的陽性率增加。
　　4、隨著病理學(xué)級(jí)別的升高，HPV基因擴(kuò)增的陽性表達(dá)率在正常、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC的患者HPV的陽性率分別是:75.00％、68.75％、100.00％、88.24％、87.50％。結(jié)果表明:HPV陽性表達(dá)在不同病理學(xué)級(jí)別組中，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5、TCT、HPV、

8、c-myc基因、hTERC基因單獨(dú)檢測(cè)對(duì)宮頸癌及CIN檢測(cè)的靈敏度分別為86.21％、92.00％、52.9％、64.40％，特異度分別為70.00％、26.70％、70.00％、70.00％。 TCT+c-myc、TCT+hTERC、HPV+c-myc、HPV+hTERC、c-myc+hTERC檢測(cè)的靈敏度分別為93.50％、95.09％、96.23％、97.15％、83.28％，特異度分別為91.00％、91.00％、78.01％、

9、78.01％、91.00％; TCT+HPV+c-myc、TCT+HPV+hTERC、 TCT+HPV+c-myc+hTERC的靈敏度分別為:99.48％、99.61％、99.81％，特異度分別為:93.40％、93.40％、98.02％。hTERC、c-myc基因單獨(dú)檢測(cè)的靈敏度和特異度均不高，但分別與常用檢測(cè)方法HPV+TCT三聯(lián)合，其特異度和靈敏度均有較大幅度的增高，較c-myc基因，hTERC基因單獨(dú)檢測(cè)及傳統(tǒng)的TCT+HPV聯(lián)

10、合檢測(cè)在靈敏度方面顯示出更大的優(yōu)越性;四聯(lián)合的靈敏度和特異度分別高達(dá)99.81％和98.02％，但同時(shí)檢測(cè)兩個(gè)基因加重了患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。
　　6、CIN患者中69例行錐切手術(shù)，其中3例失訪，66例6個(gè)月復(fù)診。66例CIN治療前、后TCT、HPV、c-myc基因、hTERC基因的檢測(cè)結(jié)果，進(jìn)行對(duì)比分析，得出CIN治療后TCT、HPV、c-myc基因、hTERC基因的陽性率明顯降低，與對(duì)應(yīng)的治療前比較，差異均有具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

11、　　結(jié)論:
　　1、C-myc、hTERC基因擴(kuò)增可能是宮頸癌形成的早期事件，在宮頸癌變的過程中c-myc、hTERC基因可能起著重要的作用，其可作為宮頸癌篩查的分子標(biāo)志。二者的擴(kuò)增情況對(duì)預(yù)測(cè)CIN復(fù)發(fā)或進(jìn)展有重要參考價(jià)值，其可作為CIN治療后的一種隨訪手段。
　　2、HPV感染與宮頸上皮內(nèi)瘤變密切相關(guān)。尤其是HPV高危型患者CIN發(fā)病率較高，HPV高危型檢測(cè)在宮頸病變的檢查中有重要意義。由于HPV感染率高，特異性太低，與宮

12、頸細(xì)胞學(xué)檢查(TCT)相結(jié)合可明顯提高宮頸病變的檢出率，為目前主要的聯(lián)合篩查CIN的方法。
　　3、HPV感染與c-myc、hTERC基因擴(kuò)增率成正相關(guān)，在宮頸癌前病變中，c-myc、hTERC基因擴(kuò)增與HPV感染在宮頸癌前病變及宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。二者在宮頸病變中的異常表達(dá)存在相關(guān)性。c-myc、hTERC基因檢測(cè)與常用檢測(cè)TCT+HPV聯(lián)合靈敏度、特異度顯示更高，所以認(rèn)為TCT+HPV+hTERC或TCT+HPV

13、+c-myc為最佳組合。
　　4、FISH技術(shù)具有客觀、可重復(fù)、無創(chuàng)等優(yōu)點(diǎn)，并且利用宮頸脫落細(xì)胞殘液對(duì)宮頸病變進(jìn)行篩查，檢測(cè)c-myc、hTERC基因，可彌補(bǔ)TCT靈敏度差、HPV特異性差的缺點(diǎn)，可作為目前“三階梯”及HPV檢測(cè)以外的有力檢測(cè)方法。
　　5、本研究采用表面等離子共振技術(shù)(SPR)對(duì)不同宮頸病變的脫落細(xì)胞HPV DNA進(jìn)行檢測(cè)。HPV陽性表達(dá)在不同病理學(xué)級(jí)別組中，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但是，與組織病理學(xué)級(jí)別沒有正相