系統(tǒng)性紅斑狼瘡和炎癥性關(guān)節(jié)病外周血Th9細胞的檢測及意義.pdf

1、目的:
　　 探討系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemiclupuserythematosus,SLE)及炎癥性關(guān)節(jié)病包括類風濕關(guān)節(jié)炎(RheumatoidArthritis,RA)、強直性脊柱炎(AnkylosingSpondylitis,AS)患者外周血CD4+T細胞IL-9、IL-17、IFN-γ表達水平和IL-9、IL-17、RORγt、IFN-γmRNA水平,為進一步闡明SLE等免疫相關(guān)疾病的發(fā)病機制、探索該類疾病新的臨床治療

2、靶點提供理論和實驗基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 分離SLE和炎癥性關(guān)節(jié)病(RA、AS)患者和健康人外周血單個核細胞(PBMC),通過免疫磁珠分選CD4+T細胞,PMA、Ion刺激,予固定、破膜劑處理,行細胞內(nèi)染色,通過流式細胞術(shù)(FCM)檢測CD4+T細胞胞內(nèi)IL-9、IFN-γ、IL-17水平;通過實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測IL-9、IL-17、RORγt、IFN-γmRNA水平。應用Pearso

3、n相關(guān)性檢驗分析胞內(nèi)IL-9水平與IFN-γ、IL-17、血清ANA滴度、C3、CRP水平、ESR值之間的關(guān)系。SLE和RA分組:①健康人對照組;②病情穩(wěn)定組;③病情活動組;AS分組:①健康人對照組;②AS患者組。
　　 結(jié)果:
　　 (1)FCM檢測CD4+T細胞,結(jié)果顯示免疫磁珠分選CD4+T細胞純度達90%以上。
　　 (2)SLE病情活動組胞內(nèi)IL-9水平顯著高于病情穩(wěn)定組(P＜0.01),而病情穩(wěn)定組又

4、高于健康對照組(P＜0.05);胞內(nèi)IFN-γ水平SLE病情活動組低于健康人對照組(P＜0.05)。A-CD3/A-CD28、PHA聯(lián)合刺激后,SLE患者CD4+T細胞胞內(nèi)IL-9水平較A-CD3/A-CD28、PHA獨立刺激組和培養(yǎng)液組顯著升高(P＜0.01),而A-CD3/A-CD28、PHA獨立刺激組和培養(yǎng)液組之間無明顯差別。SLE病情活動組患者IL-9mRNA水平顯著高于病情穩(wěn)定組(P＜0.01),而病情穩(wěn)定組又高于健康對照組(

5、P＜0.05);SLE病情活動組IFN-γmRNA低于健康人對照組(P＜0.05)。用A-CD3/A-CD28、PHA聯(lián)合刺激后,SLE患者CD4+T細胞IL-9mRNA表達水平較獨立刺激組和培養(yǎng)液組顯著升高(P＜0.01)。SLE患者CD4+T細胞胞內(nèi)IL-9水平與胞內(nèi)IFN-γ水平及患者血清ANA滴度和C3水平無明顯相關(guān)。
　　 (3)RA患者病情活動組胞內(nèi)IL-9的水平高于健康對照組(P＜0.05);RA病情活動組胞內(nèi)IL

6、-17水平高于病情穩(wěn)定組(P＜0.01),而病情穩(wěn)定組胞內(nèi)IL-17水平又高于健康人對照組(P＜0.05)。RA病情活動組IL-9mRNA的表達高于健康對照組(P＜0.01)和病情穩(wěn)定組(P＜0.05),而病情穩(wěn)定組和健康對照組無顯著差異(P＞0.05);RA病情活動組IL-17表達高于病情穩(wěn)定組(P＜0.01),而RA病情穩(wěn)定組IL-17表達又顯著高于健康對照組(P＜0.05),RA病情活動組RORγtmRNA表達高于病情穩(wěn)定組(P＜

7、0.01),而RA病情穩(wěn)定組RORγtmRNA表達又顯著高于健康對照組(P＜0.01),有統(tǒng)計學意義。RA患者胞內(nèi)IL-9水平與IL-17水平、ESR、CRP水平無明顯相關(guān)性。(4)AS患者外周血胞內(nèi)IL-9和IL-9mRNA水平和健康對照組相比無顯著差異(P＞0.05);胞內(nèi)IL-17水平和IL-17mRNA表達與健康對照組相比顯著增高(P＜0.01);胞內(nèi)IFN-γ水平和IFN-γmPNA表達較健康對照組顯著增高(P＜0.01)。<

8、br>　　 結(jié)論:
　　 (1)SLE患者外周血CD4+T細胞中Th9細胞百分比增高,Th1細胞百分比下降。Th9細胞增多、Th1細胞減少可能參與了SLE發(fā)病過程;A-CD3/A-CD28聯(lián)合PHA刺激后,T細胞活化,CD4+T細胞向Th9轉(zhuǎn)化顯著增多。
　　 (2)RA患者外周血CD4+T細胞中Th9、Th17細胞的百分比增高,Th9、Th17可能與RA的發(fā)病有關(guān)。
　　 (3)AS患者外周血CD4+T細胞中