炎癥性關(guān)節(jié)病外周血Th17細(xì)胞檢測(cè)及意義.pdf

1、引言:炎癥性關(guān)節(jié)病包括類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis,RA)、強(qiáng)直性脊柱炎(Ankylosing Spondylitis,AS)和感染性關(guān)節(jié)炎。RA是一種累及周圍關(guān)節(jié)為主的全身性、炎癥性自身免疫病,可累及心、肺、腎、血管、血液、神經(jīng)及眼等組織或器官。RA的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確,目前認(rèn)為可能是攜帶RA易感基因者被某種病原體感染后導(dǎo)致機(jī)體免疫系統(tǒng)紊亂,T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫異常是其主要的發(fā)病機(jī)制,尤其是CD4+T細(xì)胞起著關(guān)

2、鍵作用,CD4+T細(xì)胞參與了關(guān)節(jié)炎癥的激發(fā)和延續(xù)。AS的臨床特征是中軸關(guān)節(jié)的慢性炎癥,其發(fā)病機(jī)制不明,可能是一種遺傳因素(HLA-B27)占主導(dǎo)的多基因疾病?？乖岢始?xì)胞表面HLA-B27分子將處理的抗原多肽提呈給免疫活性T細(xì)胞后啟動(dòng)了發(fā)病過程,其中T細(xì)胞免疫功能異常在其發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。Th17細(xì)胞是近年新發(fā)現(xiàn)的一種輔助性T細(xì)胞,其各種特性與Th1和Th2細(xì)胞不同,產(chǎn)生的細(xì)胞因子包括IL-17、IL-21和IL-22等,可能在炎

3、癥性關(guān)節(jié)病(RA、AS)的致病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。
　　 目的:檢測(cè)炎癥性關(guān)節(jié)病(RA、AS)外周血Th17細(xì)胞比例,及CD4+T細(xì)胞IL-17蛋白表達(dá)和IL-17、RORγtmRNA水平,并初步探討其臨床意義。
　　 方法：分離炎癥性關(guān)節(jié)病(RA、AS)患者和健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC),免疫磁珠分選CD4+T細(xì)胞,經(jīng)PMA/Ion刺激,固定/透膜劑處理,然后進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)染色,流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)CD4+T細(xì)胞

4、IL-17+、IFN-γ+、IL-6+水平。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)IL-17、RORγtmRNA水平。應(yīng)用Pearson相關(guān)性檢驗(yàn)分析IL-17與IFN-γ、IL-6、ESR和CRP之間的相關(guān)性。分組:①健康人對(duì)照組；②病情穩(wěn)定組；③病情活動(dòng)組。
　　 結(jié)果：(1)免疫磁珠陰選CD4+T細(xì)胞純度達(dá)90％以上。(2)RA和AS病情活動(dòng)組IL-17表達(dá)水平顯著高于病情穩(wěn)定組(P<0.01),病情活動(dòng)組

5、和病情穩(wěn)定組又顯著高于健康人對(duì)照組(P<0.01)。用A-CD3、A-CD28、IL-23聯(lián)合刺激后,RA患者CD4+T細(xì)胞IL-17表達(dá)水平較無刺激組顯著增加(P<0.05),而AS患者無明顯增加(P>0.05)。(3)RA和AS患者CD4+T細(xì)胞IL-17、RORγtmRNA水平病情活動(dòng)組較穩(wěn)定組和對(duì)照組顯著增高(P<0.01)。用A-CD3、A-CD28、IL-23刺激后,RA和AS患者CD4+T細(xì)胞IL-17、RORγtmRNA

6、水平顯著高于未刺激組(P<0.05),刺激12h組又高于刺激24h組(P<0.01)(4)RA和AS患者CD4+T細(xì)胞IL-17蛋白水平與IFN-γ、IL-6無顯著相關(guān),與ESR、C反應(yīng)蛋白(CRP)也未見明顯相關(guān)性(P>0.05)。
　　 結(jié)論：(1)炎癥性關(guān)節(jié)病(RA、AS)患者外周血CD4+T細(xì)胞中存在異常增高的Th17細(xì)胞,異常增高的Th17細(xì)胞、以及Th17/Th1/Th2三者的比例失調(diào)可能參與了RA和AS的發(fā)病過程。