規(guī)模養(yǎng)鴨場細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)分析及病原菌耐藥性研究.pdf

1、近年來，貴州省大力發(fā)展三穗鴨養(yǎng)殖，給當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖戶帶來了經(jīng)濟(jì)效益。但養(yǎng)殖過程中大量鴨群排泄物給鴨場及周圍環(huán)境造成了污染，同時，環(huán)境細(xì)菌也會影響鴨群健康。臨床上長期使用抗生素，導(dǎo)致細(xì)菌大面積耐藥，給養(yǎng)殖業(yè)帶來了難題。為了解鴨場環(huán)境細(xì)菌種類及鴨群發(fā)病原因，本試驗對貴州省三穗縣部分鴨場環(huán)境土壤、水樣中細(xì)菌種類進(jìn)行研究，采用傳統(tǒng)方法及PCR方法對患鴨內(nèi)臟器官進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定，同時開展分離菌耐藥性調(diào)查、耐藥基因檢測及耐藥質(zhì)粒消除等試驗研究，以期為養(yǎng)鴨

2、過程中環(huán)境病原微生物的消毒控制及細(xì)菌性疫病的防治提供理論依據(jù)。
　　1.規(guī)模養(yǎng)鴨場環(huán)境細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)分析：采集貴州省部分鴨場環(huán)境土壤樣本及水樣樣本，采用試劑盒提取樣本中細(xì)菌總DNA，PCR擴(kuò)增細(xì)菌16S rDNA V3區(qū)，對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DGGE電泳，最后采用Quantity One軟件分析DGGE圖譜，并對目的條帶切膠回收并測序分析。
　　結(jié)果顯示：
　　(1)鴨場環(huán)境土壤中共有5個細(xì)菌種類，變形菌門(Proteobac

3、teria)的α，β類群、擬桿菌門(Bacteroidetes)、放線菌門(Actinobacteria)、酸桿菌門(Acidobacteria)、厚壁菌門(Firmicutes)及非培養(yǎng)細(xì)菌，其中厚壁菌門條帶最多，占44.19％；其次為變形菌門，占20.93%；擬桿菌門和放線菌門均占6.98%；酸桿菌門最少，占2.33%；非培養(yǎng)細(xì)菌，占18.60%。
　　(2)鴨場環(huán)境水樣中共有3個細(xì)菌種類，變形菌門(Proteobacteri

4、a)、厚壁菌門(Firmicutes)、酸桿菌門(Acidobacteria)和非培養(yǎng)細(xì)菌，其中變形菌門條帶最多，占56.67%；其次為厚壁菌門，占10.00%；酸桿菌門最少，占6.67%；其余為非培養(yǎng)細(xì)菌，占26.67%。
　　2.規(guī)模養(yǎng)鴨場細(xì)菌分離鑒定及致病性試驗：采集貴州省部分鴨場患鴨內(nèi)臟器官，采用鮮血營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)，挑取可疑菌落純化培養(yǎng)后進(jìn)行生化鑒定或PCR鑒定；隨機(jī)選取主要分離菌進(jìn)行致病性試驗。結(jié)果顯示：

5、患鴨內(nèi)臟器官中共分離到7個屬137株細(xì)菌，包括埃希氏菌56株，占總分離菌的40.88%(56/137)；葡萄球菌47株，占總分離菌的34.31%(47/137)；里氏桿菌14株，占總分離菌的10.22%(14/137)；變形桿菌9株，占總分離菌的6.57%(9/137)；耶爾森菌和枸櫞酸桿菌均4株，均占總分離菌的2.92%(4/137)；假單胞菌3株，占總分離菌的2.19%(3/137)。致病性結(jié)果顯示：埃希氏菌分離菌、葡萄球菌分離菌均

6、可致死BALB/c鼠，致死率分別為23.3%(7/30)和16.7%(5/30)；里氏桿菌分離菌則不可致死BALB/c鼠，致死率為0(0/9)。
　　3.規(guī)模養(yǎng)鴨場病原菌耐藥性調(diào)查及控制研究：選取15株埃希氏菌分離菌、15株葡萄球菌分離菌、3株里氏桿菌分離菌，采用藥敏紙片擴(kuò)散法進(jìn)行耐藥性分析，并對埃希氏菌E coil1進(jìn)行耐藥基因檢測和耐藥質(zhì)粒消除研究。結(jié)果表明：在20種抗生素中，埃希氏菌分離菌對10種抗生素耐藥率高達(dá)100%(1

7、5/15)，葡萄球菌分離菌對4種抗生素敏感率高達(dá)100%(15/15)，而里氏桿菌分離菌對80%的抗生素耐藥率均高于50%。埃希氏菌分離菌中可檢出TEM型和CTX-M型耐藥基因，檢出率分別為46.7%(7/15)和100%(15/15)，SHV型耐藥基因未檢出。通過高溫-SDS交替處理，埃希氏菌E coil1的耐藥質(zhì)粒出現(xiàn)丟失，且最佳條件為0.5%的SDS與43℃高溫交替處理至第7次。
　　綜上所述，貴州省部分鴨場環(huán)境土壤中主要有