人類(lèi)LIGHT胞外區(qū)基因的克隆及原核表達(dá)條件初探.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文人類(lèi)LIGHT胞外區(qū)基因的克隆及原核表達(dá)條件初探姓名：姚智燕申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：趙瑞景;金玉懷20040301中文摘要T 細(xì)胞的增殖、活化。另外其在樹(shù)突狀細(xì)胞( d e n d r i t i cc e l l s ，D C s ) 的分化成熟、胸腺細(xì)胞的陰性選擇、細(xì)胞毒性T 細(xì)胞( c y t o t o x i cTl y m p h o c y t e ，C T L ) 介導(dǎo)的抗腫瘤效應(yīng)

2、、自身免疫的發(fā)生、器官移植的免疫排斥中也起著重要作用。鑒于： ( 1 ) 與h s L I G H T 結(jié)合后介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的L T [ 3 R 僅表達(dá)在腫瘤細(xì)胞表面，而在其它正常細(xì)胞不表達(dá)或低表達(dá)；( 2 ) T 細(xì)胞表面的相應(yīng)受體與h s L I G H T 結(jié)合后可刺激T 細(xì)胞的活化、增殖，而T 細(xì)胞在機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)中起著重要作用； ( 3 ) h s L I G H T 能發(fā)揮與全長(zhǎng)人L I G H T( h L I G H

3、 T ) 相同的生物學(xué)作用，而h s L I G H T 片段較小，易于克隆、表達(dá)，且表達(dá)產(chǎn)物容易純化等原因。本研究對(duì)h s L I G H T 基因進(jìn)行了克?。粯?gòu)建了其原核重組融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒p G E X 一4 T ．2 ／h s L I G H T ；選用具有成本低、蛋白表達(dá)量高、容易純化等優(yōu)點(diǎn)的大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)，對(duì)其原核融合蛋白表達(dá)條件進(jìn)行了初步探討。旨在進(jìn)一步探討h s L I G H T 的抗腫瘤生物學(xué)活性，探索腫瘤的免疫治

4、療新方法，為h s L I G H T 蛋白用于臨床腫瘤治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并為此種生物制劑的進(jìn)一步生產(chǎn)、開(kāi)發(fā)創(chuàng)造可能性。方法：取培養(yǎng)的人早幼粒白血病細(xì)胞( H L 6 0 ) ，分別加入終濃度為6 8n g ／m l 的佛波酯( P M A ) 、0 ．3g g ／m l 的離子霉素( i o n o m y c i n ) ，3 7 ℃，5 ％C 0 2 培養(yǎng)2 4 h 后，提取細(xì)胞總R N A ，用自行設(shè)計(jì)的h s L I G H