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文檔簡介
1、本實驗構建了重組人ICOS胞外區(qū)的原核表達載體,進行了重組ICOS蛋白的表達與純化,并將其作為抗原免疫小鼠。根據GenBank基因庫中ICOS胞外區(qū)基因序列設計引物,用RT—PCR法從人T淋巴瘤細胞Jurkat的總mRNA中擴增出ICOS胞外區(qū)單鏈基因,并運用重疊延伸PCR技術擴增出ICOS胞外區(qū)雙鏈基因,將ICOS胞外區(qū)雙鏈基因插入到原核表達載體pET—28a中,對重組質粒進行鑒定。轉化E.coli BL21(DE3),IPTG誘導表
2、達目的蛋白。通過包涵體變復性純化目的蛋白,并通過Western blot鑒定目的蛋白。后將目的蛋白作為抗原免疫小鼠。結果獲得ICOS雙鏈基因大小為757 bp,構建的重組表達載體中目的基因序列完全正確。IPTG誘導表達后,SDS—PAGE分析和Westernblot鑒定表明目的蛋白在E.coli BL21(DE3)中高效表達,相對分子質量約為31KD,與預期結果相符。免疫小鼠后得到較高的抗血清效價。檢測結果表明:成功地構建人重組ICOS
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