CIK細(xì)胞對(duì)結(jié)腸癌移植瘤小鼠HIF-1a、T細(xì)胞亞群影響研究.pdf

1、目的:細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cytokine-induced killer cells，CIK)是一種增殖快，抗瘤譜廣，抗瘤活性高的免疫活性細(xì)胞，可促進(jìn)患者免疫系統(tǒng)的重建、消除殘留病變，對(duì)多種惡性腫瘤均有一定的療效?；煷嬖诠撬瓒拘?，且容易造成“免疫抑制”，不利于免疫治療。然而，近來研究發(fā)現(xiàn)許多化療藥物除具有直接的細(xì)胞毒作用外，也可作為抗腫瘤免疫反應(yīng)的佐劑，免疫治療也有增強(qiáng)化療敏感性的潛能，化療與生物治療之間有相互增效的潛能。但生物治

2、療和化療之間增效的機(jī)制復(fù)雜，研究較多的為化療與免疫逃逸。而關(guān)于免疫治療和化療對(duì)腫瘤缺氧微環(huán)境的影響研究不多。洛鉑(LBP)是第三代鉑類抗腫瘤藥物，起效快、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，在腫瘤組織中濃度高而血漿中濃度低。本研究通過檢測(cè)結(jié)腸癌26(colon26)荷瘤小鼠體內(nèi)缺氧誘導(dǎo)因子-1a(hypoxia inducible factor-1a，HIF-1a及T細(xì)胞亞群的表達(dá)，探討CIK對(duì)荷瘤小鼠體內(nèi)缺氧微環(huán)境及免疫功能的影響，進(jìn)一步探討洛鉑和CIK的聯(lián)

3、合應(yīng)用對(duì)兩者的影響作用。為化療聯(lián)合生物治療的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 1、建立小鼠結(jié)腸腺癌26(colon26)細(xì)胞移植瘤模型，從接種細(xì)胞第8天起，分別用CIK、洛鉑(LBP)+CIK、洛鉑處理，生理鹽水(NS，)處理組(control group)作為對(duì)照。小鼠于治療結(jié)束1周后引頸處死小鼠，剝離瘤體，分別稱量瘤重;取出小腸、脾組織。
　　 2、采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time PCR

4、，RT-PCR)方法檢測(cè)移植瘤小鼠瘤組織中和小鼠小腸組織中HIF-1a的基因表達(dá)。
　　 3、采用流式細(xì)胞技術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測(cè)各組小鼠脾臟單個(gè)核細(xì)胞T細(xì)胞亞群CD4+、CD8+細(xì)胞百分率以及CD4+/CD8+比值。
　　 4、采用掃描電鏡觀察各組小鼠小腸粘膜表面的變化情況。
　　 5、數(shù)據(jù)采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，定量資料用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較用t檢驗(yàn)，

5、以P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1、CIK及洛鉑對(duì)移植瘤體積的影響:與生理鹽水組相比，CIK組小鼠腫瘤體積縮小，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），洛鉑組和洛鉑+CIK組腫瘤體積縮小，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與CIK組相比，洛鉑組腫瘤體積縮小更明顯，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與洛鉑組相比，洛鉑+CIK組腫瘤體積縮小更明顯，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(Table-1)。
　　 2、

6、HIF-1a的基因表達(dá)及小鼠脾T淋巴細(xì)胞的變化:移植瘤小鼠瘤組織和小腸組織均有HIF-1a基因表達(dá)，瘤組織中HIF-1a基因表達(dá)明顯高于小腸(P＜0.05)，而健康小鼠小腸組織中未見其表達(dá)(Fig.3，4，Table-2);移植瘤小鼠脾組織中的CD4+T細(xì)胞百分率及CD4+/CD8+T比值明顯低于正常小鼠(P＜0.05)(Fig.5-9，Table-3)。
　　 3、CIK及洛鉑對(duì)小鼠瘤組織中HIF-1a的基因表達(dá)的影響:實(shí)時(shí)熒

7、光定量分析顯示，與生理鹽水組相比，CIK組小鼠瘤組織中HIF-1a的基因表達(dá)降低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);洛鉑+CIK組及洛鉑組HIF-1a的基因表達(dá)降低，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與洛鉑組相比，洛鉑+CIK組降低更明顯，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);洛鉑組與CIK組相比，洛鉑組HIF-1a降低更明顯，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(Fig.3，4，Table-2)。
　　 4、CIK及洛鉑對(duì)移植瘤小鼠脾T淋巴細(xì)胞的

8、影響:與健康對(duì)照組相比，移植瘤小鼠CD4+水平明顯降低，CD4+/CD8+倒置，比值＜1，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與生理鹽水組相比，CIK組及洛鉑+CIK組小鼠CD4+T細(xì)胞百分率、CD4/CD8均升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，洛鉑組CD4+T細(xì)胞百分率及CD4+/CD8+降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與洛鉑+CIK組比較，CIK組小鼠CD4+T細(xì)胞百分率CD4+/CD8+升高更為顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)(F

9、ig.5=9，Table-3)。
　　 5、CIK及洛鉑對(duì)移植瘤小鼠小腸粘膜的影響:掃描電鏡顯示，生理鹽水組小鼠腸粘膜變薄、萎縮，絨毛頂端潰瘍明顯(Fig.10)，而CIK組腸粘膜微絨毛寬大、鈍圓，表面平滑，接近腸絨毛項(xiàng)部為圓形，相互緊貼，密集分布，絨毛間隙狹小(Fig.11);LBP組小腸粘膜表面腸絨毛與生理鹽水組相比明顯變短，表面凹凸不平，數(shù)量減少，絨毛間距明顯增寬(Fig.12，13);LBP+CIK組小鼠腸粘膜改變與生理

10、鹽水組相比，變化不大，絨毛頂端有凸起狀潰爛(Fig.14，15)。
　　 結(jié)論:
　　 1、在colon26結(jié)腸癌移植瘤小鼠瘤組織及小腸組織中均存在缺氧誘導(dǎo)因子-1a的表達(dá)，移植瘤小鼠的免疫功能降低，單純洛鉑化療進(jìn)一步降低移植瘤小鼠的免疫功能。
　　 2、洛鉑聯(lián)合CIK，可以改善腫瘤缺氧微環(huán)境，促使免疫重建，增強(qiáng)CIK的抗瘤效果。
　　 3、CIK胃腸毒副反應(yīng)小，并且在一定程度上可改善腫瘤及化療導(dǎo)致的腸粘