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1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br> 研究HIF-1α與吳茱萸堿抑制人結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞增殖作用的關(guān)系,以及吳茱萸堿調(diào)節(jié)HIF-1α表達(dá)的可能機(jī)制。
實(shí)驗(yàn)方法:
采用結(jié)晶紫染色、流式細(xì)胞術(shù)、報(bào)告質(zhì)粒、RT-PCR、WB等實(shí)驗(yàn)技術(shù),研究吳茱萸堿抑制人結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞增殖與HIF-1α關(guān)系,以及吳茱萸堿調(diào)節(jié)HIF-1α表達(dá)的可能分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)步驟如下:
1、采用結(jié)晶紫染色、FCM、WB等技術(shù),檢測(cè)吳茱萸堿對(duì)人結(jié)腸癌LOVO細(xì)
2、胞增殖、凋亡的影響。
2、采用報(bào)告質(zhì)粒、RT-PCR和WB檢測(cè)吳茱萸堿對(duì)人結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞中HIF-1α影響。
3、采用重組腺病毒技術(shù),檢測(cè)HIF-1α過(guò)表達(dá)和沉默表達(dá)后,吳茱萸堿對(duì)人結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞增殖的影響。
4、檢測(cè)吳茱萸堿對(duì)人結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞中Akt1/2、p-Akt1/2、IGF-1表達(dá)的影響。利用IGF-1過(guò)表達(dá)腺病毒,分析其對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞中Akt1/2、p-Akt1/2/表達(dá)的影響。
3、> 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
1、吳茱萸堿抑制人結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞增殖,將細(xì)胞阻滯于S期,并誘導(dǎo)其凋亡。
2、吳茱萸堿明顯抑制人結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞中HIF-1α表達(dá),并抑制HIF-1α報(bào)告質(zhì)?;钚浴?br> 3、沉默表達(dá)HIF-1α增強(qiáng)吳茱萸堿抑制人結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞增殖作用,過(guò)表達(dá)HIF-1α減弱吳茱萸堿抑制人結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞增殖作用。
4、吳茱萸堿能抑制細(xì)胞中p-Akt1/2、IGF-1表達(dá);外源性過(guò)表達(dá)IGF
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