不同程度低氧誘導因子-1α（HIF-1α）表達對髓核細胞凋亡的影響.pdf

1、目的： 細胞凋亡在椎間盤退變中的意義越來越得到大家的關注，對于細胞凋亡機制的研究也越來越受到重視。低氧誘導因子-1α是20世紀90年代對氧感受器-信號傳導-效應基因的低氧反應通路的重要發(fā)現(xiàn)。多數(shù)學者認為HIF-1α是誘導低氧基因和維持細胞氧內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的核心因子，可以調(diào)節(jié)能量代謝，血管形成，細胞凋亡，細胞分化，基質(zhì)合成等相關基因的表達。Kee-Yong Ha等人研究發(fā)現(xiàn)在不同程度人突出椎間盤中，HIF-1α的表達程度與細胞凋亡程度

2、之間存在高度相關性，而凋亡程度的增加是否與HIF-1α的高表達有關有待于進一步研究。本實驗立足于此點，探討培養(yǎng)的髓核細胞中低氧誘導因子(HIF-1α)表達程度的不同與細胞凋亡之間的關系，進而探討低氧誘導因子與間盤退變的關系。 方法： 取30日齡SD大鼠髓核進行原代培養(yǎng)，通過控制培養(yǎng)箱氧濃度誘導低氧誘導因子不同程度表達，將傳代得到的細胞分為4組施加處理因素：A組：正常氧條件組：O2 21％，CO2 5％，N2 74％；B組

3、：低氧條件組：O2 5％，CO2 5％，N2 90％(模擬正常間盤環(huán)境)；C組：低氧條件并經(jīng)COCI2誘導組：O2 2％，CO2 5％，N2 93％(HIF-1α高表達組)；D組：低氧條件并經(jīng)Genistein(酪氨酸蛋自激酶抑制荊)處理組：O2 5％，CO2 5％，N2 90％(HIF-1α表達受抑制)。各組在各自條件下培養(yǎng)24小時，運用westem-blot檢測各組低氧誘導因子表達量，通過流式細胞儀技術檢測各組細胞凋亡情況。運用SP

4、SS11.5軟件對實驗結果進行相關分析。 結果： 通過細胞原代培養(yǎng)及純化后得到實驗所需的髓核細胞，在倒置顯微鏡下觀察可見細胞呈多角形或梭形，輪廓清楚，細胞核呈圓形。通過SABC法檢測髓核細胞中表達的Ⅱ型膠原，鏡下觀察可見細胞漿中Ⅱ型膠原被染成棕色，核圓藍染。通過Western-blot檢測到各個組中均有HIF-1α的表達，B組和C組HIF-1α表達明顯多于A組和D組，其中C組表達最多。各組間具有顯著性差異(P<0.01)

5、。流式細胞術結果可見各組細胞G0前出現(xiàn)凋亡細胞峰，C組凋亡率明顯高于各組，D組低于B組和C組。各組之間具有明顯差異(P<0.01)。C組的HIF-1α表達和凋亡率明顯高于A組和B組，而D組則低于B組和C組。相關分析提示Pearson相關系數(shù)為0.668，P<0.001，相關具有統(tǒng)計學意義。通過本實驗可以得到氧濃度越低，低氧誘導因子表達的量越多，HIF-1α表達越高細胞凋亡率越高，而加抑制劑組細胞凋亡率較HIF-1α高表達組低。