羊膜移植治療犬角膜損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、犬角膜損傷是臨床常見的眼科疾病，且致盲率較高。羊膜免疫源性低，以其優(yōu)越的理化特性而成為理想的生物移植材料。因此，為了探索犬角膜損傷的高效療法，本試驗(yàn)首先建立了犬角膜堿燒傷疾病模型，然后采用羊膜移植術(shù)對(duì)其進(jìn)行治療，并觀察病犬眼睛的臨床癥狀、角膜組織學(xué)變化及相關(guān)細(xì)胞因子TNF-α、VEGF和TGF-β1的基因相對(duì)表達(dá)量情況。
　　選取健康成年比格犬6只，將直徑6 mm的圓形濾紙片用1 mol/L NaOH溶液浸濕，置于角膜中央1 mi

2、n，然后立即用生理鹽水沖洗眼球表面，制得犬角膜堿燒傷疾病模型。取剖腹產(chǎn)犬胎兒羊膜，制備犬羊膜片，置于DMEM甘油液中，-80℃保存。本試驗(yàn)用同一條犬的左眼作為對(duì)照組，僅進(jìn)行堿燒傷;右眼為試驗(yàn)組，堿燒傷后進(jìn)行羊膜移植。術(shù)后每日觀察犬角膜水腫、角膜新生血管和眼分泌物等情況，于術(shù)后3、7、14、21、28和35 d測(cè)量眼內(nèi)壓和淚液量，并對(duì)角膜混濁、新生血管及上皮修復(fù)情況進(jìn)行評(píng)分;術(shù)后35 d采集犬角膜組織，將其分成2份，一份用于病理組織學(xué)觀察

3、，組織切片用HE染色及Masson三色染色;另一份用于熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)TNF-α、VEGF和TGF-β1的基因相對(duì)表達(dá)量。試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　(1)術(shù)后兩組犬的角膜都出現(xiàn)不同程度的水腫和眼分泌物增多癥狀，試驗(yàn)組犬眼球表面的羊膜植片較平整，羊膜于1周內(nèi)溶解，術(shù)后5d角膜緣出現(xiàn)新生血管芽，至第16d時(shí)眼分泌物減少并恢復(fù)到正常水平;而對(duì)照組犬眼術(shù)后5d角膜緣出現(xiàn)刷狀的新生血管，至第28d時(shí)仍有2只眼睛有較多的分泌物，在第6d時(shí)有

4、一只眼的角膜出現(xiàn)穿孔。至術(shù)后35d時(shí)，試驗(yàn)組犬眼在角膜混濁程度及血管新生方面明顯優(yōu)于對(duì)照組（P＜0.05），第21d時(shí)兩組犬角膜熒光素染色出現(xiàn)顯著差異（P＜0.05），試驗(yàn)組犬角膜著色明顯輕于對(duì)照組，至術(shù)后35 d時(shí)試驗(yàn)組犬角膜熒光素著色不明顯，對(duì)照組犬角膜呈淺著色。術(shù)后14d，試驗(yàn)組犬眼的眼內(nèi)壓及淚液量指標(biāo)升高，但處于正常生理范圍之內(nèi);對(duì)照組犬眼的眼內(nèi)壓極顯著降低（P＜0.01），淚液量顯著減少(P＜0.05);至第35d時(shí)兩組犬眼的

5、眼內(nèi)壓及淚液量均恢復(fù)至正常水平，但對(duì)照組處于正常生理范圍的下限。
　　(2)術(shù)后35 d，犬角膜病理組織學(xué)切片顯示:對(duì)照組犬角膜有較多的炎性細(xì)胞和新生血管，血管腔內(nèi)有成熟紅細(xì)胞，成纖維細(xì)胞肥大，基底細(xì)胞腫脹且間隙增大，膠原纖維排列紊亂;試驗(yàn)組犬角膜炎性細(xì)胞和新生血管相對(duì)較少，成纖維細(xì)胞扁平，膠原纖維排列相對(duì)較整齊。
　　(3)術(shù)后35 d，試驗(yàn)組犬角膜組織中TNF-α、VEGF和TGF-β1的基因相對(duì)表達(dá)量極顯著低于對(duì)照組（