植物病原真菌對(duì)人參莖葉皂甙的生物轉(zhuǎn)化.pdf

1、人參是我國傳統(tǒng)中藥，具有多種藥理學(xué)作用，如抗腫瘤、延緩衰老及增強(qiáng)機(jī)體免疫力等。研究表明，人參中含有人參皂甙、糖類、蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、維生素等物質(zhì)。其中，人參皂甙是人參的主要活性成分，在干燥根中的含量約為3％-4％，在人參莖葉中的含量約為5％-7％。目前，已經(jīng)從人參中分離出40多種人參單體皂甙，這些單體皂甙在人參中的含量不同，有些稀有人參皂甙在人參中含量很低甚至不存在，而這些稀有人參皂甙如Rd、Rg3、CK、Rh2等卻具有重要的生物活

2、性。直接從人參中大量提取稀有人參皂甙不符合實(shí)際，而利用生物轉(zhuǎn)化的方法將人參中含量高的皂甙轉(zhuǎn)化為稀有人參皂甙是一種切實(shí)可行的途徑。由于人參莖葉中皂甙的含量高于人參根，因此，為了更加充分的利用人參資源，本文利用植物病原真菌轉(zhuǎn)化人參莖葉皂甙來獲得稀有人參皂甙。
　　本文的主要研究內(nèi)容和研究結(jié)果如下:
　　(1)人參莖葉皂甙的分離純化和分級(jí):①利用大孔吸附樹脂法從500.00 g干燥的人參莖葉中，分離出28.55 g人參莖葉總皂甙，

3、得率為5.71％。②取10.00 g人參莖葉總皂甙，用硅膠柱層析法分離得到Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ四種級(jí)分。其中，級(jí)分-Ⅰ3.22 g，得率為32.2％;級(jí)分-Ⅱ4.02 g，得率為40.2％;級(jí)分-Ⅲ1.53 g，得率為15.3％;級(jí)分-Ⅳ0.28 g，得率為2.8％。③TLC和HPLC檢測，級(jí)分-Ⅰ主要含有人參皂甙Rg1和Rh1，是人參三醇型皂甙的混合級(jí)分;級(jí)分-Ⅱ主要含有Rd和Re，是二醇型皂甙和三醇型皂甙的混合級(jí)分;級(jí)分-Ⅲ主要含有人參皂

4、甙Rb2和Rc及少量的Rb1;級(jí)分-Ⅳ主要含有人參皂甙Rb1。
　　(2)篩選能夠轉(zhuǎn)化人參皂甙的植物病原真菌;①從10種植物病原真菌中篩選出一種能轉(zhuǎn)化級(jí)分-Ⅲ，且轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中含有稀有人參皂甙Rd、F2和CK的菌種—3.26號(hào)實(shí)驗(yàn)菌種。提取3.26號(hào)菌種的孢子液，并用孢子液轉(zhuǎn)化級(jí)分-Ⅲ，結(jié)果表明，孢子液也能轉(zhuǎn)化Rb1、Rb2和Rc，產(chǎn)生稀有人參皂甙Rd、F2和CK。②結(jié)合形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)，對(duì)3.26號(hào)真菌進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明，3.

5、26號(hào)真菌與Epicoccum sp.SP318S rRNA的相似度為99％，屬于附球霉屬（Epicoccum LK.ex Wallr.）。
　　(3)糖苷酶的酶學(xué)性質(zhì)分析:用DEAE-纖維素柱層析法分離純化3.26號(hào)菌種分泌的糖苷酶，得到初步純化的級(jí)分—E-Ⅰ。E-Ⅰ具有廣泛的pH穩(wěn)定性和溫度穩(wěn)定性，最適pH為5.0，最適溫度為40℃。用E-Ⅰ分別轉(zhuǎn)化人參莖葉皂甙級(jí)分-Ⅰ、級(jí)分-Ⅲ和級(jí)分-Ⅳ，結(jié)果表明，E-Ⅰ不能轉(zhuǎn)化人參三醇型皂