一種卵形孢霉對原人參二醇型皂甙的生物轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、人參是我國名貴中藥，其主要活性成分是人參皂甙。存在于人參中的天然人參皂甙活性較低，而那些在白參中幾乎不存在的稀有人參皂甙往往有較好的藥理學活性。在結(jié)構(gòu)上，這些稀有人參皂甙與人參中含量較多的人參皂甙Rb1、Rb2、Re等相比，僅僅是在糖基側(cè)鏈上有所不同。因此，可以通過改造人參皂甙的結(jié)構(gòu)來制備稀有人參皂甙。目前，人參皂甙改造的方法集中在化學法和生物轉(zhuǎn)化法，而生物轉(zhuǎn)化法作為一種環(huán)保型的工藝，以其高效率、低污染、高選擇性等優(yōu)點成為皂甙轉(zhuǎn)化的首選

2、方法。本論文的內(nèi)容是篩選能夠轉(zhuǎn)化原人參二醇型皂甙Rb1、Rb2、Re混合物的植物病原真菌，并選取其中一種真菌深入研究其轉(zhuǎn)化途徑。
　　本論文的第一部分篩選了22種植物病原真菌，探究其轉(zhuǎn)化原人參二醇型皂甙Rb1、Rb2、Re混合物為稀有人參皂甙的能力，其中僅有2種真菌不能對底物進行轉(zhuǎn)化，其余20種真菌轉(zhuǎn)化底物的結(jié)果如下:有8種真菌可以將底物轉(zhuǎn)化成Rd，Rd是主要的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物;有6種真菌轉(zhuǎn)化底物的終產(chǎn)物是F2，中間產(chǎn)物主要是Rd;有6種

3、真菌轉(zhuǎn)化底物的終產(chǎn)物是C-K，中間產(chǎn)物主要有Rd和F2。由于1.91號真菌轉(zhuǎn)化底物為稀有人參皂甙C-K的效率較高，故選取1.91號真菌初步進行了形態(tài)學鑒定，1.91號真菌屬于半知菌類叢梗孢目叢梗孢科卵形孢霉屬（Oospora Wallr.）。
　　本論文的第二部分研究了卵形孢霉（Oospora Wallr.）及其胞外糖苷酶對二醇型人參皂甙Rb1、Rb2、Rc的轉(zhuǎn)化過程。結(jié)果表明:卵形孢霉轉(zhuǎn)化人參皂甙Rb1的途徑為:Rb1→Rd→F

4、2→C-K;轉(zhuǎn)化人參皂甙Rb2的途徑為:Rb2→C-O→C-Y。由于原人參二醇型皂甙中Rb1的含量最高，因此優(yōu)化了卵形孢霉轉(zhuǎn)化人參皂甙Rb1的條件:最佳底物添加時間是孢子預培養(yǎng)12h后;轉(zhuǎn)化最適pH值是5.0-6.0;轉(zhuǎn)化最適溫度為45℃。采用V8汁培養(yǎng)基對卵形孢霉進行擴大培養(yǎng)，得到胞外糖苷酶，對其進一步純化，得到糖苷酶GE-Ⅰ。GE-Ⅰ對Rb1、Rb2的轉(zhuǎn)化過程為:Rb1→Rd→F2→C-K;Rb2→C-O→C-Y→C-K。根據(jù)糖苷酶